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铜虫 (初入文坛)

[求助] 免疫荧光

我用免疫荧光技术检测Marc-145细胞中的目的蛋白，信号非常强，但是做为阴性对照的细胞中没有目的蛋白的表达却也被检测出了明显的荧光信号，这是为什么？是因为我用的一抗和二抗的浓度过高吗？

1楼 2013-03-07 09:34:23

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新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2013-03-07 17:00:06
jiapingshk: 金币+10, ★有帮助 2013-03-11 10:57:11

1，没有封闭好。
2，一抗二抗时间太长。
3，二抗浓度太高，或者二抗质量不行，特异性程度不高。

2楼2013-03-07 16:20:59

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新虫 (小有名气)

★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 16:19:29

有一点要注意，有些细胞本身就会有自发荧光，用confocal照相时要扣除自发荧光！

寻找真正的自我！

3楼2013-03-07 17:21:19

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金虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-31 16:19:45
gyesang: 回帖置顶 2013-05-31 16:19:47

如果阴性细胞也能检测出非常强的阳性信号，那么你就很有必要摸索下一抗的二抗的适宜浓度了
我就曾经在二抗浓度过高的情况下，阴性细胞全检测出阳性信号，同时浓度高带来了洗涤的彻底性的难度。

忍得住诱惑，耐得住寂寞

4楼2013-03-31 18:22:58

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