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chenxi3099

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于ZipTip C18微量层析柱使用方法

请教各位,有谁用过ZipTip C18微量层析柱?对蛋白样品纯化浓缩、脱盐等预处理,以便进行质谱分析。。可以直接用移液枪操作吗?谢谢~
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coelicolor

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lovibond: 金币+2, 鼓励新虫应助 2013-03-12 14:50:47
hsd3521: 应助指数+1 2013-03-13 18:56:32
Zip-Tip C18除盐方法

准备试剂:ACN,50% ACN(ddH2O稀释),0.1% TFA
1、        用ACN洗涤Tip 3-5次,除去杂质
2、        用0.1% TFA洗涤Tip 5-10次,平衡
3、        用20 uL 0.1% TFA溶解抽干的肽段(或酶切后的肽段溶液),Tip反复吹吸20次,让肽段充分吸附到Tip上
4、        用0.1% TFA洗涤Tip 3-5次,除去未结合的杂质
5、        在新EP管内加入20 uL 50% ACN,Tip反复吹吸10次,洗脱Tip结合的肽段
6、        用ACN反复洗涤Tip10次,除去所有杂质,让Tip再生。从步骤2开始进行新样品除盐
7、        如果进行MALDI-TOF分析,在步骤5后可直接用MATRIX将肽段洗脱到点样板上;如果进行LC-MS/MS分析,将步骤5产生的肽段旋干,再用0.1% 甲酸溶解
注:每只Tip可处理3个样品
另:直接用移液器操作,和小白枪头一样使用。或者跟中黄色的枪头一样。
要有最遥远的梦想
2楼2013-03-12 14:45:22
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chenxi3099

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by coelicolor at 2013-03-12 14:45:22
Zip-Tip C18除盐方法

准备试剂:ACN,50% ACN(ddH2O稀释),0.1% TFA
1、        用ACN洗涤Tip 3-5次,除去杂质
2、        用0.1% TFA洗涤Tip 5-10次,平衡
3、        用20 uL 0.1% TFA溶解抽干的肽段(或酶切后的肽段溶液),T ...

很有用,谢了~
3楼2013-03-13 14:48:11
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