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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白纯化
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化

我用镍柱纯化下来的蛋白在冻融一两次后，大部分蛋白就发生沉淀了，这是为什么？有方法避免吗？
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1楼 2013-03-02 15:21:01
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zyx335588

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jiapingshk at 2013-03-04 11:37:48
我是用原核表达系统表达的蛋白，本身就没有活性呀。...

蛋白的保存有很多方法，依蛋白的性质不同，其是否能够冻存也不一定，这都需要试验来摸索，。某些蛋白有可能在冻存过程中发生了结构的变化，产生你说的沉淀现象，建议你加一些甘油试试，如果还不行则建议你换用其他保存方式。各种方法保存后后的蛋白活性如何这也需要与新鲜的蛋白样品做活性对照试验。
另外，除非你确定你的蛋白需要翻译后修饰等才有活性，否则不能给笼统的说元和表达的蛋白都没有活性。现在的好多试验用蛋白样品都是通过原核表达获得的，包扩一些生物医药产品。
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7楼2013-03-05 09:25:52
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jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加5-50%的甘油试试。
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静心做事。
2楼2013-03-02 20:52:49
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jiangyhai at 2013-03-02 20:52:49
加5-50%的甘油试试。

为什么会沉淀呢？跟咪唑浓度有关吗？
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3楼2013-03-03 09:45:25
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崔士元

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白反复冻融会不会失活？蛋白失活应会沉淀吧
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男人，就要对自己狠一点！
4楼2013-03-03 14:06:18
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