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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转染时细胞融合度一定要达到60%到80的融合度吗？
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)

[求助] 转染时细胞融合度一定要达到60%到80的融合度吗？

我想做个增殖曲线图，分别测0，24，48，72h的细胞数目(MTT法)。但是如过果等到细胞融合度达到60%到80%时再转染的话。48h细胞的数目已经很多了，更别提72h了，根本没法测，或者测出来不准了，如果不等到细胞达到60%到80%融合度时转染，细胞转染后会死很多。各位大虾有什么高见没啊。郁闷并求助中。
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keepon
1楼 2013-03-02 08:48:46
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lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhlf1989513: 金币+2, ★有帮助 2013-03-04 17:42:18
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-03-10 10:29:58
如果用96孔板做增殖的话，不需要考虑融合率，细胞数5000-10000（根据细胞生长速率选择）；
如果先在6孔板转染再转移到96孔板的话，再根据细胞生长速率，选择低点的融合率，可以摸索一下，比如50%；
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寻找真正的自我！
2楼2013-03-02 09:51:21
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-03-02 09:51:21
如果用96孔板做增殖的话，不需要考虑融合率，细胞数5000-10000（根据细胞生长速率选择）；
如果先在6孔板转染再转移到96孔板的话，再根据细胞生长速率，选择低点的融合率，可以摸索一下，比如50%；

兄台，有啥好的建议没？要做一个增殖曲线图的话。。。
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keepon
3楼2013-03-04 17:56:01
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lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得肯定有一个点适合转染，因为对你的细胞不了解，还需要你自己摸索！
不过你可以早上铺板，下午转染；或晚上晚点铺板，早上早点转染；
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寻找真正的自我！
4楼2013-03-05 08:39:24
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhlf1989513: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-03-07 22:40:00
你是不是可以先转染细胞，48小时候后收细胞，然后重新铺板，与对照细胞铺一样的细胞数，进行MTT实验
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-03-05 18:24:59
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lhs521521 at 2013-03-02 09:51:21
如果用96孔板做增殖的话，不需要考虑融合率，细胞数5000-10000（根据细胞生长速率选择）；
如果先在6孔板转染再转移到96孔板的话，再根据细胞生长速率，选择低点的融合率，可以摸索一下，比如50%；

那您觉得在6孔板里转染后多长时间再转到96孔板里面呢？我是做的瞬转噢。
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keepon
6楼2013-03-07 22:44:45
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2013-03-05 18:24:59
你是不是可以先转染细胞，48小时候后收细胞，然后重新铺板，与对照细胞铺一样的细胞数，进行MTT实验

可是我做的是瞬转。。质粒在72小时候会不会失效了呢？那转到96孔板后我就最多只能测24小时的mtt值了？还是说质粒转进去了就一定存在在细胞里已经融合进入染色体内了呢？可是为什么很多人都说瞬时转染质粒后一定要在72小时内测生物活性指标呢？
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keepon
7楼2013-03-07 22:50:32
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lhs521521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-03-07 22:44:45
那您觉得在6孔板里转染后多长时间再转到96孔板里面呢？我是做的瞬转噢。...

曾经做过转染完24h后，消化，计数，重新铺在96孔板，分不同时间的！
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寻找真正的自我！
8楼2013-03-08 08:54:52
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八头小猪

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-03-07 22:50:32
可是我做的是瞬转。。质粒在72小时候会不会失效了呢？那转到96孔板后我就最多只能测24小时的mtt值了？还是说质粒转进去了就一定存在在细胞里已经融合进入染色体内了呢？可是为什么很多人都说瞬时转染质粒后一定要在 ...

瞬转质粒在12小时以后就开始表达了，持续表达至80小时，然后会降解或整合，所以最好在72小时内进行检测
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9楼2013-03-08 09:08:24
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zhlf1989513

金虫 (小有名气)
可是那样做的话你时间点怎么定呢？质粒转染后必须在72小时内测生物活性指标吗？
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keepon
10楼2013-03-09 18:43:08
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