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huanyi

金虫 (小有名气)


[交流] 有做产甲烷微生物研究的吗?能不能就所用引物及研究方面做个交流

试验的规模很小,用烧瓶做发酵罐~现在想最后做微生物种群分析,看到大家用的引物有细菌的,有古菌的,但差别还挺大的,大家都是怎么选择的呀?可以直接参考别人文献里的引物吗?需不需要自己试试几种引物在做呢?
    由于这边实验室是初次做这类的,没有人带,一头抹黑,不知道怎么入手~
自己是菜鸟,现在看到对样品的预处理,我都拿不定,看文献上说是先离心再提取DNA,与泥样的步骤差不多~但是,我的发酵液含固率8%,总觉得离心之后应该是用上清液还是底物?{自己觉得液体和固体里都有微生物,利用离心就能把悬浮液中的微生物离心到底部吗?再说每次取样的话都肯定是去等体积量,不像是泥样可以取等质量,所以我怕取得是等体积量但又不等质量,最后离心的质量又不统一,或者说我直接就用体积作单位?}有点混淆了。。。
希望高手,或有经验的人士给点意见?万分感谢~
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假大空

木虫之王 (文学泰斗)



huanyi(金币+1): 谢谢参与
??
2楼2013-03-01 20:10:22
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huanyi(金币+1): 谢谢参与
3楼2013-03-01 21:01:47
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huanyi

金虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 假大空 at 2013-03-01 20:10:22
学习

呜呜,有没有人会啊~
4楼2013-03-01 21:28:56
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★ ★
huanyi(金币+1): 谢谢参与
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流! 2013-03-05 16:52:20
用古细菌引物研究methanogen用细菌引物研究细菌,离心之后用pellet,上清液丢掉。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2013-03-02 00:05:15
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huanyi

金虫 (小有名气)


送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by kiruwa at 2013-03-02 00:05:15
用古细菌引物研究methanogen用细菌引物研究细菌,离心之后用pellet,上清液丢掉。

谢谢啊,有什么需要注意的地方建议吗?
6楼2013-03-02 17:28:01
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fakeandff

金虫 (小有名气)



huanyi(金币+1): 谢谢参与
培养基一般是溶液离心后还是在液体中,不会被离心沉淀的,而菌体会被离心沉淀在底部,关键是离心的速率是多少能否完全离心。离心后的菌体可以称量。
8楼2013-03-04 08:51:46
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huanyi

金虫 (小有名气)


引用回帖:
8楼: Originally posted by fakeandff at 2013-03-04 08:51:46
培养基一般是溶液离心后还是在液体中,不会被离心沉淀的,而菌体会被离心沉淀在底部,关键是离心的速率是多少能否完全离心。离心后的菌体可以称量。

谢谢~理解了~这个离心速率以及时间看些文献参考写应该没多大问题的~但你说的菌体称量,这个估计够呛的,难道就是提前称量好离心管,再加入定量的样品,离心后倒掉上清液,在称重吗?这样想来还是蛮合理的,谢谢啊
9楼2013-03-05 15:59:13
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niuyuniu

金虫 (小有名气)



huanyi(金币+1): 谢谢参与
产甲烷菌的增长速率如何
10楼2014-02-12 21:15:33
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feng37ye

新虫 (初入文坛)



huanyi(金币+1): 谢谢参与
可以用标记基因(16s rRNA基因)和功能基因(mcrA基因)的特异性引物实现对产甲烷菌的基因扩增。mcrA基因是甲基辅酶M还原酶,是甲烷生产中一种重要的酶,存在于所有已知的产甲烷菌种。
11楼2014-10-02 15:04:42
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简单回复
2013-03-02 23:21   回复  
huanyi(金币+1): 谢谢参与
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