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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 有做产甲烷微生物研究的吗？能不能就所用引物及研究方面做个交流
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huanyi

金虫 (小有名气)

[交流] 有做产甲烷微生物研究的吗？能不能就所用引物及研究方面做个交流

试验的规模很小，用烧瓶做发酵罐~现在想最后做微生物种群分析，看到大家用的引物有细菌的，有古菌的，但差别还挺大的，大家都是怎么选择的呀？可以直接参考别人文献里的引物吗？需不需要自己试试几种引物在做呢？
    由于这边实验室是初次做这类的，没有人带，一头抹黑，不知道怎么入手~
自己是菜鸟，现在看到对样品的预处理，我都拿不定，看文献上说是先离心再提取DNA，与泥样的步骤差不多~但是，我的发酵液含固率8%，总觉得离心之后应该是用上清液还是底物？{自己觉得液体和固体里都有微生物，利用离心就能把悬浮液中的微生物离心到底部吗？再说每次取样的话都肯定是去等体积量，不像是泥样可以取等质量，所以我怕取得是等体积量但又不等质量，最后离心的质量又不统一，或者说我直接就用体积作单位？}有点混淆了。。。
希望高手，或有经验的人士给点意见？万分感谢~
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1楼 2013-03-01 19:24:38
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假大空

木虫之王 (文学泰斗)
★
huanyi(金币+1): 谢谢参与
??
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2楼2013-03-01 20:10:22
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zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)
★
huanyi(金币+1): 谢谢参与
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3楼2013-03-01 21:01:47
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huanyi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 假大空 at 2013-03-01 20:10:22
学习

呜呜，有没有人会啊~
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4楼2013-03-01 21:28:56
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kiruwa

专家顾问 (职业作家)
★ ★
huanyi(金币+1): 谢谢参与
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-03-05 16:52:20
用古细菌引物研究methanogen用细菌引物研究细菌，离心之后用pellet，上清液丢掉。
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huanyi
5楼2013-03-02 00:05:15
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huanyi

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by kiruwa at 2013-03-02 00:05:15
用古细菌引物研究methanogen用细菌引物研究细菌，离心之后用pellet，上清液丢掉。

谢谢啊，有什么需要注意的地方建议吗？
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6楼2013-03-02 17:28:01
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fakeandff

金虫 (小有名气)
★
huanyi(金币+1): 谢谢参与
培养基一般是溶液离心后还是在液体中，不会被离心沉淀的，而菌体会被离心沉淀在底部，关键是离心的速率是多少能否完全离心。离心后的菌体可以称量。
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8楼2013-03-04 08:51:46
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huanyi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by fakeandff at 2013-03-04 08:51:46
培养基一般是溶液离心后还是在液体中，不会被离心沉淀的，而菌体会被离心沉淀在底部，关键是离心的速率是多少能否完全离心。离心后的菌体可以称量。

谢谢~理解了~这个离心速率以及时间看些文献参考写应该没多大问题的~但你说的菌体称量，这个估计够呛的，难道就是提前称量好离心管，再加入定量的样品，离心后倒掉上清液，在称重吗？这样想来还是蛮合理的，谢谢啊
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9楼2013-03-05 15:59:13
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niuyuniu

金虫 (小有名气)
★
huanyi(金币+1): 谢谢参与
产甲烷菌的增长速率如何
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10楼2014-02-12 21:15:33
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feng37ye

新虫 (初入文坛)
★
huanyi(金币+1): 谢谢参与
可以用标记基因(16s rRNA基因)和功能基因（mcrA基因）的特异性引物实现对产甲烷菌的基因扩增。mcrA基因是甲基辅酶M还原酶，是甲烷生产中一种重要的酶，存在于所有已知的产甲烷菌种。
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11楼2014-10-02 15:04:42
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yingying15887楼
2013-03-02 23:21   回复  
huanyi(金币+1): 谢谢参与
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