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赵建雪

银虫 (正式写手)

[求助] 这几个方法的公式是什么，急求

略做改动，将 10 个果的果皮切碎充分混合，取 0.5 g 鲜样放入 10 ml 1%
HCl 甲醇溶液室温黑暗中浸提 2h。用分光光度计测定提取液在 553 nm 和
600 nm 处的吸光值，二者之差即为花青苷的相对含量。差值每增加 0.01
定义为一个单位 U。设 3~5 次取样重复。单位u/g.FW
PAL 活性测定：取 0.5ml 酶液加入 2.5ml 的反应液 [硼酸缓冲液
（pH8.8），0.01M 苯丙氨酸]，在 34oC 反应 30min 后用 0.5ml 35%（W/V）
的三氯乙酸终止反应，在 5,000g 离心 5min 除去变性的蛋白质。反应生成
的肉桂酸含量用在 290nm 处的吸光值来表示。每分钟光密度变化 0.001 所
需的酶量为 1 单位。对照实验用不加苯丙氨酸的反应液代替正常的反应液
进行。单位同上
CHI 活性测定： 2’，4，4，6’-四氢苯基苯乙烯酮的合成由柚皮素加
入 50% KOH 后酸化，然后用乙醇进行重结晶备用。取 0.75ml 的酶提液加
入 2ml 下列混合液[50mM Tris-HCl，pH7.4，牛血清蛋白 7.5mg/ml，50mM
KCN]，然后加 50μl 1mg/ml 的查尔酮溶液，在 34oC 水浴 30min，另取同
量的酶提液沸水浴 10min 为对照，测定在 381nm 波长处的吸光值的变化
来表示 CHI 的酶活性。每分钟光密度变化 0.001 所需的酶量为 1 单位。单位同上。
此外有没有测ANS活性的方法
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自己的路只有自己能负责
1楼 2013-02-26 15:56:29
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舞动-青春

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
赵建雪: 金币+5, 博学EPI+1, ★★★很有帮助 2013-04-09 21:40:11
引用回帖:
10楼: Originally posted by 赵建雪 at 2013-04-08 19:10:40
先按要求配好的话，再混合那样缓冲液的物质量浓度都变了，并且各物质混合的量是多少也不确定呀...

先配母液，例如5ML提取液需要5*0.05mol抗坏血酸，你可以配制0.5mol/L的母液，这样取0.5ML母液就可以了，其他的与这个方法一样，最后用蒸馏水或者溶液定容到5ML
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11楼2013-04-09 15:52:48
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舞动-青春

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

版主只测这2个酶？
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2楼2013-04-01 12:38:27
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 舞动-青春 at 2013-04-01 12:38:27
版主只测这2个酶？

本来测四个，但CHI的KCN没法卖，所以现在打算测PAL,DFR,UFGH,问一句知道测ANS/LDOX,CHS的方法吗
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自己的路只有自己能负责
3楼2013-04-02 12:20:55
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舞动-青春

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

内容已删除
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4楼2013-04-02 15:53:06
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 舞动-青春 at 2013-04-02 15:53:06
有文献说亚硫酸氢钠可以代替氰化钾，效果也很好。后面的酶我也没找到方法，你哪个学校的呀？

烟台大学的
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自己的路只有自己能负责
5楼2013-04-07 11:16:12
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舞动-青春

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 赵建雪 at 2013-04-07 11:16:12
烟台大学的...

山东农大有个研究生用的是亚硫酸氢钠
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6楼2013-04-07 20:33:12
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 舞动-青春 at 2013-04-07 20:33:12
山东农大有个研究生用的是亚硫酸氢钠...

你有他具体的做法吗，或者你能告诉我是谁嘛
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自己的路只有自己能负责
7楼2013-04-07 20:55:11
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 舞动-青春 at 2013-04-07 20:33:12
山东农大有个研究生用的是亚硫酸氢钠...

顺带问一下5 ml 提取液 [0.05 mol· L-1Na2HPO4/KH2P4(pH 7.0) 0.05 mol· L-1抗坏血酸 0.018 mol· L-1巯基乙醇]这提取液是一下子配好的，还是先配各个缓冲液，又混合的，能有具体的方法吗
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自己的路只有自己能负责
8楼2013-04-07 21:10:56
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舞动-青春

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 赵建雪 at 2013-04-07 21:10:56
顺带问一下5 ml 提取液 这提取液是一下子配好的，还是先配各个缓冲液，又混合的，能有具体的方法吗...

分别配好，最后混合
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9楼2013-04-08 13:43:36
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 舞动-青春 at 2013-04-08 13:43:36
分别配好，最后混合...

先按要求配好的话，再混合那样缓冲液的物质量浓度都变了，并且各物质混合的量是多少也不确定呀
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自己的路只有自己能负责
10楼2013-04-08 19:10:40
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