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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 山水88 at 2013-02-21 13:31:08
加前面的就ok了,而且这个表也没必要太依赖,随便加三个也是可以的

加酶切位点时要考虑PMD18T的酶切位点吗?具体是什么原则呢?
11楼2013-02-22 20:45:31
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
9楼: Originally posted by imyting at 2013-02-21 20:58:11
保护碱基的一个非常重要的作用是在限制性内切酶结合靶DNA时起支架作用,酶都有自己特有的识别位点以及切割位点,而所谓的酶切位点只是切割位点;为了便于酶与靶DNA的结合,在切割位点周围必须有一定长度的DNA序列供 ...

加酶切位点时要考虑PMD18T的酶切位点吗?具体是什么原则呢?
12楼2013-02-22 20:45:47
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
6楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-02-21 12:43:01
那个表是提醒你那样加不好,随便几个就行,不要有hairpin

加酶切位点时要考虑PMD18T的酶切位点吗?具体是什么原则呢?
13楼2013-02-22 20:46:00
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
2楼: Originally posted by polepolar at 2013-02-20 17:13:26
如果只加一个保护碱基的话,那切割率是很低的,保险期间还是加3个以上吧.

加酶切位点时要考虑PMD18T的酶切位点吗?具体是什么原则呢?
14楼2013-02-22 20:46:13
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山水88

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这个当然得考虑了,你不能添加的酶切位点的载体上本来就有吧?这样你切下来就乱了
15楼2013-02-22 20:56:47
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 山水88 at 2013-02-22 20:56:47
这个当然得考虑了,你不能添加的酶切位点的载体上本来就有吧?这样你切下来就乱了

那比如像EcoR I 在T载体上有,我就不能加了吗?可是别人经常用啊
16楼2013-02-22 21:19:18
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山水88

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by yuguiyan at 2013-02-22 21:19:18
那比如像EcoR I 在T载体上有,我就不能加了吗?可是别人经常用啊...

别人经常用不代表你就可以用呀,要结合自己载体的信息来决定用哪些酶切位点,自己学的是方法,不是全部的照搬
17楼2013-02-23 20:30:16
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 山水88 at 2013-02-23 20:30:16
别人经常用不代表你就可以用呀,要结合自己载体的信息来决定用哪些酶切位点,自己学的是方法,不是全部的照搬...

都是一样的T载体啊,T载体上有EcoR 1,你知道能不能用吗?请问?
18楼2013-02-23 21:28:19
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polepolar

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by yuguiyan at 2013-02-22 20:46:13
加酶切位点时要考虑PMD18T的酶切位点吗?具体是什么原则呢?...

其实不用考虑的,你只要加的酶切位点是常用的就可以,并且保证克隆后的质粒再进行酶切时切的充分就行.
北京普尔普乐生物技术有限公司(www.polepolar.com)
19楼2013-02-25 09:40:47
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李小冬

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by yuguiyan at 2013-02-22 20:45:25
加酶切位点时要考虑PMD18T的酶切位点吗?具体是什么原则呢?...

PMD18T 载体, 没有克隆位点。
哎呀呀
20楼2013-05-10 16:25:53
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