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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T细胞培养需不需要加hygromycin B
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tjufyn

金虫 (正式写手)

[求助] T细胞培养需不需要加hygromycin B

各位虫友，
      本人刚接触T细胞培养，所用T细胞需要先解冻再加入37C的RPMI1640中，按照以前师兄的protocol需要加hygromycin B，但是这是一种药物，有可能会杀死细胞，又查了文献说刚解冻的细胞比较脆弱，不能加hygromycin B。请问到底应不应该加啊？细胞比较少，所以不敢轻易尝试。

     谢谢
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大家好
1楼 2013-02-14 12:46:55
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manyang1989

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
tjufyn: 金币+75, ★★★很有帮助 2013-02-14 23:31:25
不需要加hygromycin B, 他会杀死细胞，细胞需要温和的media。
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2楼2013-02-14 13:18:01
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dianshineng

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-02-14 17:55:35
tjufyn: 金币+50, ★★★★★最佳答案 2013-02-14 23:31:32
一般不需要啊。楼主培养的细胞比较少，多的话可以一部分做尝试。
但本人做过T细胞培养，没有加潮霉素，加了会破坏T细胞贴壁生长。
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天道酬勤
3楼2013-02-14 15:06:11
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tjufyn

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dianshineng at 2013-02-14 15:06:11
一般不需要啊。楼主培养的细胞比较少，多的话可以一部分做尝试。
但本人做过T细胞培养，没有加潮霉素，加了会破坏T细胞贴壁生长。

我们现在是先用RPMI1640和FBS先将解冻的细胞养2-3天，然后再加hygromycin，L-glutamine 和 penicillin-streptomycin。具体的Media配方如下：
500ml PPMI 1640（with phenol acid）
50 ml FBS(inavtivation)
after the cell grows well,
add 10 ml 1mg/ml hygromycin B
add 2mM L-glutamine 和 penicillin-streptomycin.
您看这样可以吗？十分感谢
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大家好
4楼2013-02-15 03:34:25
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