应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Western Blot结果 条带中间 不见了，请教高手！
52/1返回列表
查看: 3751  |  回复: 13
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

格子和潇潇

铜虫 (小有名气)

[求助] Western Blot结果 条带中间 不见了，请教高手！

第一次A样本，用B抗体曝光如下图：


第二次B样本，用同样的B抗体曝光出现了2条带，好像是中空的，两次的二抗浓度都是一样的，都是1:5000，可能是有些高，但是为啥第一次曝光就没事呢？


请教各位高手
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2013-02-01 22:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

格子和潇潇

铜虫 (小有名气)
说一下，关于荧光猝灭导致条带中空的问题，很早就发现了，上来说一下，应该就是原因
赞一下 回复此楼
13楼2013-07-17 18:52:46
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析，欢迎交流 2013-02-03 09:32:08
问题可能有两种情况：
一：本身应该是一条带，由于电泳、转膜或者暴光胶片等原因，出现两条带。
二：抗体识别分子量接近的两条带，第一次由于抗体过强或者是电泳的原因，两条带没有分开。
我感觉第二种情况的可能性更大一些。
赞一下 回复此楼
2楼2013-02-02 12:12:22
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

格子和潇潇

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-02-02 12:12:22
问题可能有两种情况：
一：本身应该是一条带，由于电泳、转膜或者暴光胶片等原因，出现两条带。
二：抗体识别分子量接近的两条带，第一次由于抗体过强或者是电泳的原因，两条带没有分开。
我感觉第二种情况的可能 ...

一抗为单克隆抗体，本身应该为一条带；
电泳、转膜都没问题，其他一起的内参背景较浓，很可能是二抗浓度大或者没洗好的原因；
曝光时间短或者长都是这个情况；
马上要回家了，也来不及验证了
赞一下 回复此楼
3楼2013-02-02 12:53:17
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-02-03 09:33:55
第一次的曝光时间太长了
曝光要在看的出各泳道差异的情况下尽量浅一些
第二次的没问题
可能是抗体特异性/蛋白异构体/降解/修饰 各种原因
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-02-02 20:31:30
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭