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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 既然实验做不出来就来这发发牢骚！
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wl554520877

铁虫 (初入文坛)

[交流] 既然实验做不出来就来这发发牢骚！ 已有4人参与

破实验烂实验，马上毕业了越急越乱，越做越差，无语了，做个荧光定量，早些时候自己提取RNA虽然有gdna污染，但是rna还是不错的，接着就往下做了摸索下面的过程，结果后续这些过程也是各种困难各种麻烦，眼看春节了想想做不出来我就把所有rna给提了翻转录下，可是近来提rna也提不出来了，一个星期做下来全白费，今天想想用试剂盒吧，结果测了质量还不错，本觉得的有些欣慰，泡个电泳一看，心凉个半截，烦躁啊！烦归烦大家帮我看看这个电泳图吧，260/280都是1.8以上，应该是降解了吧！

IMG_5081.JPG
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WilliamHJ

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只为毕业！没出息吧，呵呵~~
1楼 2013-01-28 20:53:44
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wl554520877

铁虫 (初入文坛)
没人来和我说说话自己先顶上，呵呵~~
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只为毕业！没出息吧，呵呵~~
2楼2013-01-28 21:00:01
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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没做过rna的实验，也看不出什么东西来，不过，摸摸楼主~~我最近也是没有进度，不过是因为自己没规划好的缘故，哈哈~

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学习中
3楼2013-01-28 22:45:06
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你跑胶的注意事项都做了么
你跑的DL2000的marker么
RNA跑的时候是看28s 18s 5s吧，你上个DL2000说明啥？
跑RNA的时候东西都要处理吧，提RNA的时候东西也要处理吧。水你用的啥水，处理了吧。
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4楼2013-01-28 22:49:55
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
哎 RNA提成这样，估计楼主真是够烦心的了
不过我提的是昆虫细胞的rna，从没出现过这个问题，估计给不了楼主啥建议了
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5楼2013-01-29 06:52:14
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wl554520877

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mamadexiao at 2013-01-28 22:49:55
你跑胶的注意事项都做了么
你跑的DL2000的marker么
RNA跑的时候是看28s 18s 5s吧，你上个DL2000说明啥？
跑RNA的时候东西都要处理吧，提RNA的时候东西也要处理吧。水你用的啥水，处理了吧。

上个d2000证明胶没问题电泳也没问题，还有28s长度也是差不多的，那你说跑得的过程是不是也有可能降解呢，我120v跑了20分钟
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只为毕业！没出息吧，呵呵~~
6楼2013-01-29 09:00:24
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wl554520877

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaoweiwei121 at 2013-01-29 06:52:14
哎 RNA提成这样，估计楼主真是够烦心的了
不过我提的是昆虫细胞的rna，从没出现过这个问题，估计给不了楼主啥建议了

谢谢你呵呵~~都坦然了！
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只为毕业！没出息吧，呵呵~~
7楼2013-01-29 09:00:54
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杜保群

金虫 (小有名气)

专业微流控
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先：胶有问题  因为你的MARKer 跑的都拖尾
其次：你的是RNA，跑DL2000MARKer 没有意义 RNA是单链 DNA是双链的DL2000MARKer
另外：有少量的基因组DNA污染
最后：提取的RNA有严重的降解 可是你用的耗材没有灭菌 也可能是你的操作有些慢了 因为提取RNA时间越短越好 也可能是你配的试剂没有调好PH值 这个很重要 另外不要迷恋试剂盒
错误之处 望大家指正
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需要微流控相关的都可以找我 杜15911012041
8楼2013-01-29 10:49:32
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wl554520877

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 杜保群 at 2013-01-29 10:49:32
首先：胶有问题  因为你的MARKer 跑的都拖尾
其次：你的是RNA，跑DL2000MARKer 没有意义 RNA是单链 DNA是双链的DL2000MARKer
另外：有少量的基因组DNA污染
最后：提取的RNA有严重的降解 可是你用的耗材没有灭菌 ...

我们实验室跑胶染料用的gelred基本都是这个鬼样子包括maker，你讲的maker跑来没意义我也认为是对的，dna污染也看得到，最后一点我觉得我有做的不好的地方就是操作慢条斯理的，看来要动作麻利点，之前用的枪头我都是自己用depc水浸泡灭菌的，近来用的是axygen的应该没问题吧！？对了还有这个rna提取的ph真的自己不明白，求讲解，我的另外一个话题里有我的提取方法，这个ph8.0到底是那些试剂要这个ph，还请你帮忙，请大家帮助！
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只为毕业！没出息吧，呵呵~~
9楼2013-01-29 11:09:02
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