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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 在做质粒转化时，没有在无菌的环境下加入LB，使细菌复苏，对后续实验有无影响？
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lezhen_22

铁虫 (初入文坛)

[求助] 在做质粒转化时，没有在无菌的环境下加入LB，使细菌复苏，对后续实验有无影响？

在做质粒转化时，没有在无菌的环境下加入500ul的LB培养液，涂板时做了3块板，2块涂了转化好的细菌，1块空白什么也没涂。结果2块涂了细菌的培养皿上只长了一个菌落。那么这个菌落有没有可能是杂菌。
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1楼 2013-01-27 09:03:37
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lezhen_22: 金币+1, ★有帮助 2013-01-27 11:01:51
没有在无菌环境下加入LB，影响不大，毕竟板子上有抗生素，一些霉菌也不可能在二十四小时没长起来
但是如果只长了一个菌落的话，感觉有点悬，很有可能不是你需要的东西
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2楼2013-01-27 09:27:22
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

刚才打字错误，一些霉菌不可能在二十四小时内长起来
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3楼2013-01-27 09:28:17
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
涂平板加了抗生素的啊，应该不会有多大影响

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2013-01-27 09:28:41
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microblue

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-27 19:04:29
首先空白的不该什么都不涂，真正的对照应该是用一管感受态细胞加入水同样电一下，确保你的感受态细胞没有污染。
其次楼上说的对，板上有抗生素问题不大。
长一个多半都不是，是突变子。你要是不放心就把它培养起来再提质粒看看有没有你要的质粒，一种可能是接到液体里面它也长不起来了，另一种可能就是提不出来东西。
我的建议就是重做。
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5楼2013-01-27 11:01:09
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lezhen_22

铁虫 (初入文坛)
多谢！！
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6楼2013-01-27 11:05:05
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lezhen_22

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by microblue at 2013-01-27 11:01:09
首先空白的不该什么都不涂，真正的对照应该是用一管感受态细胞加入水同样电一下，确保你的感受态细胞没有污染。
其次楼上说的对，板上有抗生素问题不大。
长一个多半都不是，是突变子。你要是不放心就把它培养起来 ...

我用的是目的基因与载体过夜连接的反应液，进行的转化。目的是想知道质粒是否构建成功。所以能够长出的菌落应该也会很少，那么这个菌落还是有可能是突变子吗？
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7楼2013-01-27 11:14:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lezhen_22 at 2013-01-27 11:14:18
我用的是目的基因与载体过夜连接的反应液，进行的转化。目的是想知道质粒是否构建成功。所以能够长出的菌落应该也会很少，那么这个菌落还是有可能是突变子吗？...

一般做正常的连接转化不会只长一个菌落，所以前面大家说有点悬。是不是正确的转化子，你挑一下菌落筛做下筛选鉴定很容易就知道了。至于加LB复苏时候没有严格无菌操作，问题不是很大，因为板子上有抗生素。当然最好是无菌条件下做。
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8楼2013-01-27 12:28:49
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)
问题应该不大，长多长少跟很多因素有关的，检测一下就OK了。
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9楼2013-01-28 10:15:40
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
是不是杂菌 检测一下不就得了
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10楼2013-01-29 07:09:57
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