| 查看: 1366 | 回复: 11 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
shiliyusly新虫 (小有名气)
|
[求助]
还是QPCR
|
||
|
大家好！我现在刚接触QPCR，看了大量资料，还有一点不是很清楚，还请高手指点啊。。。。 优化QPCR条件的时候，要看溶解曲线是不是单峰，还要看扩增效率是否在90%-110%，最后跑电泳看是否是自己要的条带，这是完整的过程。可是问题是，我要做的基因有10几个，那么是不是每个基因都要做5个浓度梯度扩增效率曲线呢，这样一来昂贵的进口试剂用的超级快啊，有点扛不牢啊，想问说是不是溶解曲线好的并且是用的别人文献发表过的引物（但是退火温度可能不一样），扩增效率曲线是不是就不用做了呢？ 不知道大家是怎么个程序呀？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 PCR问题集锦 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有58人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
chenguestc
木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 576 (博士)
- 贵宾: 0.4
- 金币: 4526.9
- 散金: 1639
- 红花: 176
- 帖子: 4708
- 在线: 353.5小时
- 虫号: 1337860
- 注册: 2011-07-05
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
shiliyusly: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 13:17:03
感谢参与，应助指数 +1
shiliyusly: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 13:17:03
|
优化QPCR条件的时候，要看溶解曲线是不是单峰，还要看扩增效率是否在90%-110%，最后跑电泳看是否是自己要的条带，这是完整的过程。 是的。 可是问题是，我要做的基因有10几个，那么是不是每个基因都要做5个浓度梯度扩增效率曲线呢，这样一来昂贵的进口试剂用的超级快啊，有点扛不牢啊， 每个基因必须做梯度做一个标准曲线，包括你的基因和内参基因的，这些基因或许可用同一个内参（具体咨询你们领域的乡亲们需要） 想问说是不是溶解曲线好的并且是用的别人文献发表过的引物（但是退火温度可能不一样），扩增效率曲线是不是就不用做了呢？ 还是要做，不同机器，不同公司的CHMICAL都有差异。 |
4楼2013-01-25 10:15:58
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| 优化条件时首先要看熔解曲线是否是单峰。多峰的话说明有非特异扩增或者引物二聚体，这样肯定不适宜做定量的。扩增效率也是需要测的。如果你用了别人发表的引物采取不同的退火温度，扩增效率在不同的温度下可能会有不同，所以不能省略扩增效率曲线。基因多也是没有办法的，每对引物都要做扩增效率曲线的。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
shiliyusly2楼2013-01-25 08:16:45
shiliyusly
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 265.4
- 散金: 17
- 红花: 1
- 帖子: 138
- 在线: 71.5小时
- 虫号: 1434769
- 注册: 2011-10-10
- 专业: 食品科学基础
我昨天做了2个基因的扩增效率曲线，ACT(内标基因)，F3'H，这2个基因都有点小峰，ACT效率有140%，F3'H只有80%。唉，这2个基因都是直接拿别人文献用的，却是这个效果。 3楼2013-01-25 09:38:00
chenguestc
木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 576 (博士)
- 贵宾: 0.4
- 金币: 4526.9
- 散金: 1639
- 红花: 176
- 帖子: 4708
- 在线: 353.5小时
- 虫号: 1337860
- 注册: 2011-07-05
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
5楼2013-01-25 10:29:39
20