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liurz

金虫 (正式写手)

[求助] Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾

Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾,如图分别是酶切前后图片。请分析一下原因谢谢。酶切体系为20ul,其中两内切酶各1ul,酶为NEB公司产品。

酶切前.jpg



酶切后.jpg

[ Last edited by liurz on 2013-1-24 at 22:38 ]
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haitian0625

金虫 (小有名气)

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同意2楼说法,酶切貌似不完全,不过你酶量加的很多了,不知多少浓度的酶,按照NEB官网,你的酶量已经在20U左右了。还是再尝试延长酶切时间吧。弱弱的问下,你双酶切后没小片段,双酶离得很近?
19楼2013-01-25 18:48:21
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

酶切不完全。酶切完全时,片段之间的亮度比例应该与片段的大小成正比。
2楼2013-01-25 08:22:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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liurz: 金币+1, 有帮助 2013-01-25 14:31:11
感觉是酶切体系中质粒用量太大。你的质粒看起来浓度不错,20ul酶切体系里面你放了多少ug质粒?
3楼2013-01-25 08:34:07
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yesali

木虫 (正式写手)

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liurz: 金币+1, 有帮助 2013-01-25 14:31:22
质粒的量过多,适当减少质粒
另外酶切体系可适当增大到40ul
4楼2013-01-25 08:55:25
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