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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白保存

在二十度的室温下，原核表达的蛋白能保存多长时间？
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1楼 2013-01-23 17:09:19
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
量多，低温冷冻干燥！
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2楼2013-01-23 17:41:32
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhenwuhuang at 2013-01-23 17:41:32
量多，低温冷冻干燥！

我是想在二十度下对蛋白进行酶切，时间短了怕切不开，长了又怕蛋白分解，不知道蛋白能坚持多长时间。
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3楼2013-01-23 20:28:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jiapingshk: 金币+10, ★有帮助 2013-01-24 09:50:32
引用回帖:
3楼: Originally posted by jiapingshk at 2013-01-23 20:28:17
我是想在二十度下对蛋白进行酶切，时间短了怕切不开，长了又怕蛋白分解，不知道蛋白能坚持多长时间。...

不知道你要做什么酶切，目的是什么，酶切后又想做什么分析。一般室温下蛋白质也不是那么容易分解的，只是温度高蛋白质会慢慢变性。事实上变性的蛋白往往是蛋白酶更好的底物。这种实验往往是在native条件下做的，虽然蛋白酶的活性降低了，但减少了蛋白自身变性影响酶切的因素。
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4楼2013-01-24 08:06:37
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-24 08:06:37
不知道你要做什么酶切，目的是什么，酶切后又想做什么分析。一般室温下蛋白质也不是那么容易分解的，只是温度高蛋白质会慢慢变性。事实上变性的蛋白往往是蛋白酶更好的底物。这种实验往往是在native条件下做的，虽 ...

我是想用TEV蛋白酶切一个蛋白的组氨酸标签，切除标签后用核磁共振去分析蛋白结构，二十度切五个小时没问题吧？
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5楼2013-01-24 09:54:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jiapingshk at 2013-01-24 09:54:21
我是想用TEV蛋白酶切一个蛋白的组氨酸标签，切除标签后用核磁共振去分析蛋白结构，二十度切五个小时没问题吧？...

我觉得你最好在4°C切过夜。20度当然活性更高一点，对蛋白来说4°C更稳定。
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6楼2013-01-24 11:58:22
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-24 11:58:22
我觉得你最好在4°C切过夜。20度当然活性更高一点，对蛋白来说4°C更稳定。...

可是我的这个蛋白不好切，4°C过夜切不动呀，只能提高温度了
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7楼2013-01-24 14:18:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jiapingshk at 2013-01-24 14:18:53
可是我的这个蛋白不好切，4°C过夜切不动呀，只能提高温度了...

有可能的话查一查蛋白的热稳定性资料。有些蛋白室温下的稳定性也不错的。祝你实验成功。
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8楼2013-01-24 15:45:10
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