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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 植物山茶过氧化氢酶（CAT）活性测定问题
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mrsfnxh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by starseacow at 2013-01-25 22:24:11
PVP影响不大，以前我试过单纯在磷酸盐缓冲液里冰浴研磨，虽说效果不好，但酶活还是可以测出来的。我建议的方案3你有做么？检测结果如何？...

请问一下 测酶活提取酶时PVP的作用是保护酶不失活吗 能请教下机理是什么呢？
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11楼2013-06-20 21:20:01
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by mrsfnxh at 2013-06-20 21:20:01
请问一下 测酶活提取酶时PVP的作用是保护酶不失活吗 能请教下机理是什么呢？...

PVP的作用主要是吸附一些植物细胞中的酚类物质，避免它们对酶活性的影响
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12楼2013-06-20 21:36:37
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mrsfnxh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by starseacow at 2013-06-20 21:36:37
PVP的作用主要是吸附一些植物细胞中的酚类物质，避免它们对酶活性的影响...

是不是可以这么理解：一方面，PVP、PEG可以吸附酚类物质，避免酚类物质络合酶蛋白沉淀，保护酶活；另一方面，测定PPO、POP时，吸附酚类物质也防止了酚类物质同底物儿茶酚竞争导致测定的酶活比实际偏低
可以这么理解吗？
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13楼2013-06-20 22:30:11
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by mrsfnxh at 2013-06-20 22:30:11
是不是可以这么理解：一方面，PVP、PEG可以吸附酚类物质，避免酚类物质络合酶蛋白沉淀，保护酶活；另一方面，测定PPO、POP时，吸附酚类物质也防止了酚类物质同底物儿茶酚竞争导致测定的酶活比实际偏低
可以这么理 ...

可以
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
14楼2013-06-20 22:57:20
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a71840584

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
senlinpeiyu: 金币+1, 谢谢 2013-06-27 12:14:48
我也出现过上升的趋势，我觉着哈酶提取液还是加PVP和EDTA，然后尽量4℃，再就是H2O2，买瓶新的，不行多加点，反应快了我们可以缩短测定时间呀，都换一遍再试试
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再牛逼的肖邦也弹不出哥的忧伤。。。
15楼2013-06-26 20:14:57
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彗星

银虫 (小有名气)
时隔一年，楼主问题解决了没啊？我现在在做CAT活性测试，出现了同样的问题方法差不多，也是加入CAT酶液后，240nm处吸光度一直在上升，观察比色皿中反应液，里面不断产生好多小气泡（应该是CAT催化过氧化氢分解的结果），是不是这些越来越多的小气泡影响了吸光度呢？？
补充：反应体系不加CAT标液240nm处吸光度约为0.4；反应体系加入CAT标液后吸光度降为约0.23，但随反应时间延长，吸光度不降反升
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流浪是天生的本领，回忆是后来的故事
16楼2014-04-17 16:34:11
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senlinpeiyu

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 彗星 at 2014-04-17 16:34:11
时隔一年，楼主问题解决了没啊？我现在在做CAT活性测试，出现了同样的问题方法差不多，也是加入CAT酶液后，240nm处吸光度一直在上升，观察比色皿中反应液，里面不断产生好多小气泡（应该是CAT催化过氧化氢分解 ...

买试剂盒，
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17楼2014-04-18 15:07:02
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yiyong0714

新虫 (初入文坛)
我也遇到了，有没有好的方法？
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18楼2014-07-30 19:03:29
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aimaidaodao

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我觉得是你比色杯里的反应液没有混合均匀。
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19楼2014-08-29 10:34:01
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nagewo

新虫 (初入文坛)
我也遇到了这个问题，楼主怎么解决的啊。我发现我另外一组植物用同样地方法提取酶液和测试方法么问题，但是换了一组植物就出现上升。。。。同楼主问题一样
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20楼2015-08-06 00:06:43
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