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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR扩增效率低
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wangzhe163

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by yinchang at 2013-01-22 10:37:55
建议你用hindIII切一下线性化质粒，部分材料上说质粒的形态会影响扩增的效率。另外，今年AEM今年有篇文章专门讨论定量扩增效率的，建议你看一下，我阅读的结论是只要有合适的分析方法，没有必要过分纠结于扩增效率， ...

要求是内参的扩增效率和待测的扩增效率是一直的，要么都低，要么都高，现在是待测因子的扩增效率高，内参的扩增效率低。在simple T 上有hindIII这个酶切位点吗，在map上没找到 啊。
        顺便问一下，在检测的时候，溶解曲线出现杂峰会对实验结果造成多大的影响？
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拼搏定能成功
11楼2013-01-23 08:30:39
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dongrh1981

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangzhe163: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啊 2013-01-24 16:41:40
建议下次做的时候顺带设置一个绘制溶解曲线步骤，观察PCR过程是否存在引物二聚体及非特异性扩增现象，另外酶切切不开可以考虑换用NEB的酶。
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呼吸的痛
12楼2013-01-23 15:07:00
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phhcrab

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
wangzhe163: 金币+2, ★有帮助 2013-03-14 19:18:42
首先你可以在仪器上设一个温度梯度，摸一下看哪个温度会好一些。
然后确认一下你的序列会不会存在二级结构，因为有些序列在较低温度退火时可能会存在二级结构的，这样肯定影响扩增效率，你反而要提高一下退火温度试试。
当然也可以找找是否存在试剂的问题。
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13楼2013-03-14 12:04:02
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sfj311

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yesali at 2013-01-21 10:55:52
是不是试剂出问题了，换换PCR mix试试

这个MIx过期还能用吗
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14楼2014-09-15 10:58:44
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xwqz0309

新虫 (小有名气)
请教你一个问题，请问在做实时荧光定量PCR时，你通常怎么判断两个不同基因的扩增效率是不是一致？是通过标曲中的E值吗？
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15楼2018-07-11 11:36:16
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xwqz0309

新虫 (小有名气)
请教你一个问题，请问在做实时荧光定量PCR时，你通常怎么判断两个不同基因的扩增效率是不是一致？是通过标曲中的E值吗？
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16楼2018-07-12 08:13:58
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xwqz0309

新虫 (小有名气)
请教你一个问题，请问在做实时荧光定量PCR时，你通常怎么判断两个不同基因的扩增效率是不是一致？是通过标曲中的E值吗？
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17楼2018-07-13 09:43:29
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