[交流] 植物体内脯氨酸和丙二醛MDA含量的测定方法

大家有木有实际做过植物体内脯氨酸和丙二醛含量测定的。植物的鲜样取多少合适呢？因为已经做过植物体内SOD、POD、CAT活性的测定，植物的鲜样不多了，所以这两个指标测定时想少取样。请大家贡献下自己的具体操的实验步骤呗，谢谢大家啦。还有就是我做得是煤矿区植物施肥方式是否对植物生长有影响的实验，这两个指标能说明问题吗？

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1楼 2013-01-21 09:48:45

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userhung

禁虫 (文学泰斗)

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lanse2010(金币+1): 谢谢参与
xy656691: 金币+10, 应助指数+1, 很有用 2013-01-21 11:47:28

http://www.doc88.com/p-215659570612.html
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http://zhidao.baidu.com/question/79948605.html

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3楼2013-01-21 10:50:00

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假大空

木虫之王 (文学泰斗)

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2楼2013-01-21 10:20:57

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starseacow

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lanse2010(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+4, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-21 20:27:31

丙二醛测定：
MDA通过硫代巴比妥酸法测定。取0.500 g样品，加5%三氯乙酸5 ml，研磨后所得匀浆在3000 r/min下离心10 min，根据5.4.5.2项下方法测定上清液中蛋白质含量。取上清液2 ml，加0.67%硫代巴比妥酸2 ml，混匀后在100℃水浴30 min，冷却后3000 r/min离心10 min。取上清液测定在450 nm、532 nm和600 nm处吸光度值，按如下公式计算MDA浓度。
丙二醛含量（umol/mg蛋白）=[6.45*(A532-A600)-0.56*A450*V*a]/w
公式中，A532、A600、A450分别代表532 nm、600 nm、450 nm波长下吸光度值；v（ml）为反应总体积；a为样品最终测定时稀释倍数；w（mg/ml）为匀浆上清液中蛋白质含量。

方法来源：王学奎. 植物生理生化实验原理和技术（第2版）[M]，高等教育出版社，2006：280-281

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4楼2013-01-21 17:26:39

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starseacow

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amisking: 回帖置顶 2013-01-21 20:27:37

植物组织在逆境下遭受氧化胁迫时，常常会发生膜脂过氧化作用，MDA是其产物之一。MDA含量的高低反映了植物细胞膜过氧化作用的强弱与质膜的破坏程度。而脯氨酸积累，也是植物对抗活性氧迸发的手段。你要做的是对植物生长的影响，我感觉单凭这两个指标说明不了太大问题，不同施肥方式会影响抗植物抵抗胁迫能力么？如果你就这个问题入手做实验，你现在的实验体系恰当么？

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