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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Trizol 法 RNA提取失败 请虫友帮忙分析下 什么原因?该怎么办吖
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dada126602

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cai3110274: 金币+3, ★★★很有帮助, 我没有换氯仿 只是减少了细胞的量 加氯仿后 涡旋更充分一点 现在没有红色 是上清了 你的可能是和材料有关吧 2013-01-19 20:25:19
我提取血清的时候也是上清液有点红，不论是trizol还是用qiagen的kit。我买了新的氯仿但是还没到，所以在等。如果楼主换了氯仿或者采取别的方法，上清液不红了的话。请更新下。我15个样品的260/280基本上都在1.5-1.6之间，无比郁闷
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火锅
11楼2013-01-19 03:50:31
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cai3110274

木虫 (职业作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-18 07:36:15
可能是细胞加多了。混匀我一般也没有注意时间，大概是2×15秒吧。氯仿的疏水性更强，主要作用是抽提TRIZOL里面的酚，加速分层。氯仿一般不会有问题吧。...

麻烦帮我看一下 这是我新提的RNA  算合格吗？

10000349584316.jpg
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夫天地者万物之逆旅
12楼2013-01-19 20:30:37
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gastrodia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cai3110274: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢 2013-01-22 21:42:20
从12楼的胶图看RNA的质量很高，现在测OD260,280.和230，若260/280在1.9-2.1之间就很好，且260/230在2以上就说明没有巯基乙醇、乙醇和trizol的污染
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13楼2013-01-19 21:42:51
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yuhanjie0205

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有比较严重的DNA污染，建议少一些细胞，Trizol多匀浆一会，匀浆后导入离心管静止15-20min，离心取上清加氯仿后用手使劲摇。个人感觉涡旋力度不太够，我一般都是用手摇。
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14楼2013-01-20 00:01:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
cai3110274: 金币+3, ★★★很有帮助, 感谢你的耐心指导 2013-01-20 10:12:31
引用回帖:
12楼: Originally posted by cai3110274 at 2013-01-19 20:30:37
麻烦帮我看一下 这是我新提的RNA  算合格吗？

10000349584316.jpg
...

新提的这次应该是不错。虽说电泳有拖尾，不过看你的marker也有些问题，可能是电泳时间有些长。跑RNA最好不要跑太久，否则电泳时也会造成降解。
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15楼2013-01-20 01:29:09
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fuchange918

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by cai3110274 at 2013-01-19 20:30:37
麻烦帮我看一下 这是我新提的RNA  算合格吗？

10000349584316.jpg
...

楼主还在不，可不可以把你的步骤发一份给我啊？我现在Trizol法提取后，质量也是不理想，向您取取经
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16楼2014-09-08 18:52:49
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jijianhuij

木虫 (小有名气)
跑胶用新缓冲液，低电压，跑15分钟即可，切忌跑时间长，跑胶的问题，RNA很好提，我现在都当成DNA来提都没事，稍微注意点就可以
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17楼2014-09-08 21:34:36
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cai3110274

木虫 (职业作家)
引用回帖:
16楼: Originally posted by fuchange918 at 2014-09-08 18:52:49
楼主还在不，可不可以把你的步骤发一份给我啊？我现在Trizol法提取后，质量也是不理想，向您取取经...

你好 我用的就是网上可以搜到的 液氮碾磨法 细节上我也没做变动
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夫天地者万物之逆旅
18楼2014-09-10 18:42:29
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fuchange918

木虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by cai3110274 at 2014-09-10 18:42:29
你好 我用的就是网上可以搜到的 液氮碾磨法 细节上我也没做变动...

哦 谢谢
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19楼2014-09-10 22:01:50
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