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candydada516新虫 (初入文坛)
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[求助]
关于肝组织用蛋白质裂解液和蛋白酶抑制剂的运用
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请问各位虫虫大人： 我最近要做一个关于肝纤维化机理的实验，需要做蛋白芯片方面的，但是 肝组织的蛋白裂解液选择不确定，现在有一个方案，想请大家看后给予意见和建议，方案如下： 1）将组织用包含蛋白酶抑制剂（如aprotinin 或者inhibitor cocktail）和低浓度（小于0.2%）非离子型去垢剂的PBS缓冲液进行匀浆（超声或机械匀浆）。 2）裂解液不要包含任何有机溶剂如DMSO。 3）将组织裂解液离心并将上清液冻存在-20度以下。 4）以裂解液作为matrix加入空白背景孔，标准品以及QC的孔中 参照此建议，我们可以在加了抑制剂的PBS缓冲液中超声或匀浆提取蛋白，用WB或BCA蛋白定量来判断我们的提取效率？以确保先把蛋白提取出来？ 拜托虫虫大人们了~ |
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