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Zedone

木虫 (正式写手)

[求助] 有关在野生菌基础构建过表达细菌的问题

小弟手上有一株降解细菌,革兰氏阴性,基因X是编码该细菌降解Y物质的还原酶的基因。前段时间一直有一个想法,想通过向该菌野生型导入携带基因X片段的表达质粒,使还原酶在野生型基础上表达量增加,以构建出高降解能力的菌株。(我先前在用该表达质粒回补X基因缺失菌株的时候,不仅恢复了功能,而且比野生型的降解能力稍微搞一些。)
     但是按照设想构建出来的菌株的降解能力不但没有提高,反而降低了。自己不知该如何解释这一奇怪的现象。前请各位大神能否帮忙解释和推测其原因,感激不尽。
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55晴朗天天

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by Zedone at 2013-01-13 22:04:21
E.coli 异原表达做过,没大的效果...

哦,那就不知道了,我用的是E.coli     感受态的  
那找找合适的质粒~
有梦就有希望!想就有可能!
8楼2013-01-16 13:47:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Zedone: 金币+5, ★★★很有帮助, 沉默子?能否讲的详细些呢 2013-01-13 22:19:49
silence掉了。一般做过表达的时候要把原来的野生拷贝敲掉,否则可能出问题。即使实现过表达,株系也不稳定。
3楼2013-01-13 01:50:44
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55晴朗天天

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Zedone: 金币+5 2013-01-13 22:04:31
同行,同行~
我也正在做一株阴性降解菌,不过我的目标是降解基因,也是导入质粒,不过是没有影响的基因片段
就你的情况,基因的控制是微妙的,相互之间的影响也是不可预见的,一般构建高效菌 都是将高效基因 插入到容易生长的菌体中,这样构建的。
你知道这段基因,是吧,那你不如就把这段基因 导入简单的菌体中,比如E coli. 可以达到你的目的~
希望对你有帮助~
有梦就有希望!想就有可能!
4楼2013-01-13 15:28:50
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Zedone

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 55晴朗天天 at 2013-01-13 15:28:50
同行,同行~
我也正在做一株阴性降解菌,不过我的目标是降解基因,也是导入质粒,不过是没有影响的基因片段
就你的情况,基因的控制是微妙的,相互之间的影响也是不可预见的,一般构建高效菌 都是将高效基因 插入 ...

E.coli 异原表达做过,没大的效果
5楼2013-01-13 22:04:21
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