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Zedone木虫 (正式写手)
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[求助]
有关在野生菌基础构建过表达细菌的问题
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小弟手上有一株降解细菌，革兰氏阴性，基因X是编码该细菌降解Y物质的还原酶的基因。前段时间一直有一个想法，想通过向该菌野生型导入携带基因X片段的表达质粒，使还原酶在野生型基础上表达量增加，以构建出高降解能力的菌株。(我先前在用该表达质粒回补X基因缺失菌株的时候，不仅恢复了功能，而且比野生型的降解能力稍微搞一些。) 但是按照设想构建出来的菌株的降解能力不但没有提高，反而降低了。自己不知该如何解释这一奇怪的现象。前请各位大神能否帮忙解释和推测其原因，感激不尽。 |
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4楼2013-01-13 15:28:50
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【答案】应助回帖
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Zedone: 金币+10, 嗯，说的很详细。你所说的解决办法我做过的，也就是该基因的突变菌株回补实验。当时的效果是升高量不太明显，所以才决定这么做的。按照你的说法，我想可以在前面加个强启动子。3q 2013-01-14 11:00:23
Zedone: 金币+10, 嗯，说的很详细。你所说的解决办法我做过的，也就是该基因的突变菌株回补实验。当时的效果是升高量不太明显，所以才决定这么做的。按照你的说法，我想可以在前面加个强启动子。3q 2013-01-14 11:00:23
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你的这种情况是同源依赖性基因沉默。就是说你把另一个相同的基因拷贝转到宿主里后发现导入的和原有的拷贝都表达下降，甚至完全不表达。引起这个的原因可能有转录水平或者转录后水平的。转录水平的基因沉默与形成异染色质或者DNA甲基化有关。转录后沉默是mRNA形成后不稳定而不能形成正常的翻译产物。 当然，因为沉默的机理的复制性，过表达时候用野生背景也不一定发生沉默，有时候也能实现过表达。所以，为了避免沉默，过表达往往建在突变株的背景上。既然你的过表达株系发生了这个问题，解决你的问题的最简单的办法是如果你能把原来的拷贝敲除掉的话，用那个背景做过表达就没有问题了。 |
6楼2013-01-14 02:50:30