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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)

[求助] 为什么我做的SDS-PAGE分离胶凝固后上半部分稀下半部分浓?谢谢

为什么我做的SDS-PAGE分离胶凝固后上半部分稀下半部分浓?谢谢
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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你是不是没有搅匀啊~~~一般不会的~~~各种组分一定要混合均匀才能够灌胶

当然凝得不好也有可能出现这种现象~~~

还有就是 你是不是还没到完全凝固就把它拿出来了啊?现在天气很冷,凝固时间会大大加长的。

另外你灌胶的时候是不是太慢了?前一毫升下去都开始凝了,你才加后一毫升,这样一层一层的可能它凝不均匀?
2楼2013-01-11 22:19:24
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
jiapingshk: 金币+10, 有帮助 2013-01-20 23:16:03
我觉得是不是pH的问题~~~

你配分离胶的pH 没有用错吧~~~ 如果说是压成一条线了 感觉跟浓缩胶的现象有点像。也就是你上半部分的pH是正常的8.8 但是 去到下面 就可能pH 变了 然后那些蛋白质就都走到一块儿去了。。。
12楼2013-01-12 15:46:32
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普通回帖

jiapingshk

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by porphybaby at 2013-01-11 22:19:24
你是不是没有搅匀啊~~~一般不会的~~~各种组分一定要混合均匀才能够灌胶

当然凝得不好也有可能出现这种现象~~~

还有就是 你是不是还没到完全凝固就把它拿出来了啊?现在天气很冷,凝固时间会大大加长的。

另 ...

我是在恒温箱中凝的胶,电泳完毕后,胶的上半部分大小不同的条带分得很开,下半部分大小不同的条带几乎跑到了一条线上,我怀疑是某一做胶的药有问题
3楼2013-01-11 22:50:24
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匿名

用户注销 (职业作家)

Matlab专家

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wg423: 应助指数-2, 恶意刷应助指数 2013-01-12 07:02:59
本帖仅楼主可见
4楼2013-01-11 23:56:52
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wangyh2028

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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要跑一个marker,就知道是不是胶的问题。你这样猜来猜去的比较麻烦。另外,在保证药品配制规范的前提下,不要轻易怀疑药品的质量,除非药品时间太长。
5楼2013-01-12 01:05:27
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wangyh2028

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

总之,应该首先从自身操作来找问题的原因。
6楼2013-01-12 01:07:25
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
3楼: Originally posted by jiapingshk at 2013-01-11 22:50:24
我是在恒温箱中凝的胶,电泳完毕后,胶的上半部分大小不同的条带分得很开,下半部分大小不同的条带几乎跑到了一条线上,我怀疑是某一做胶的药有问题...

丙烯酰胺溶液是自己配的吗?配置时丙烯酰胺:甲叉丙烯酰胺的比例是否按照标准做的?你跑的是多少浓度的胶?如果所有都正确,可能是你选取的胶浓度不合适,可以用浓度高一点的胶或者做梯度浓度胶。
7楼2013-01-12 07:31:39
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xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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可能是你配胶的试剂有点问题,也可能是你的蛋白不够纯的事
8楼2013-01-12 09:46:13
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jiapingshk

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wangyh2028 at 2013-01-12 01:05:27
要跑一个marker,就知道是不是胶的问题。你这样猜来猜去的比较麻烦。另外,在保证药品配制规范的前提下,不要轻易怀疑药品的质量,除非药品时间太长。

marker也跑了,条带不对呀,情况和样品蛋白的一样
9楼2013-01-12 10:56:22
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秋水素心

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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同实验室其他人跑了吗,如果别人正常,那试剂就没问题。蛋白胶的分子质量存在10%误差,会不会是你片段大小太接近,你确定你制胶的过程没问题?玻板洗干净了?
认真过好每一天!
10楼2013-01-12 12:18:26
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