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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)

[求助] PCR

战友们,我用PCR扩增一下我的目的基因,扩增完成后,我用微量核酸测定仪测出来的OD260/280=1.8左右,浓度700ng/ul。但是跑胶时为什么只有marker。目的基因一点都没有
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lovelydong

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yanjiwuluo: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-12 15:08:22
首先你的目的基因片段有多大,跟你的marker是不是匹配。另外你样品孔能否看到引物二聚体的条带?
2楼2013-01-11 11:04:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
700ng/ul浓度很高了,跑胶应该可以明显看到的。PCR时的模板没有加多吧?样品如果大量形成引物二聚体也会影响DNA含量的测定。
3楼2013-01-11 11:28:44
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platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yanjiwuluo: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-12 15:10:42
那说明你测到的是引物二聚体,而不是你的目的条带哦!
4楼2013-01-11 17:43:46
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尹祥杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
yanjiwuluo: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-12 15:09:28
使你没有跑出来吧。电压也会有关系的。
众浪大化中,不喜也不惧。
5楼2013-01-11 23:30:59
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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lovelydong at 2013-01-11 11:04:18
首先你的目的基因片段有多大,跟你的marker是不是匹配。另外你样品孔能否看到引物二聚体的条带?

应该与marker匹配的。没有二聚体出现,什么都没有
6楼2013-01-12 15:08:17
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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 尹祥杰 at 2013-01-11 23:30:59
使你没有跑出来吧。电压也会有关系的。

多少合适呢?我的你、目的基因在1000bp左右把
7楼2013-01-12 15:09:23
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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by platanus at 2013-01-11 17:43:46
那说明你测到的是引物二聚体,而不是你的目的条带哦!

这说明我要再提高退火温度吗?有几个有条带但是很弱
8楼2013-01-12 15:10:33
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cory0931

至尊木虫 (文坛精英)

巫山云

怀疑没有扩出来;
锤之千古
9楼2013-01-13 19:36:37
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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by cory0931 at 2013-01-13 19:36:37
怀疑没有扩出来;

的确没扩增出来,唉,郁闷,难道引物的事?怎么老出问题
10楼2013-01-14 20:40:55
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