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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)

[求助] PCR

战友们，我用PCR扩增一下我的目的基因，扩增完成后，我用微量核酸测定仪测出来的OD260/280=1.8左右，浓度700ng/ul。但是跑胶时为什么只有marker。目的基因一点都没有
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1楼 2013-01-11 10:41:23
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lovelydong

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yanjiwuluo: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-12 15:08:22
首先你的目的基因片段有多大，跟你的marker是不是匹配。另外你样品孔能否看到引物二聚体的条带？
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2楼2013-01-11 11:04:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
700ng/ul浓度很高了，跑胶应该可以明显看到的。PCR时的模板没有加多吧？样品如果大量形成引物二聚体也会影响DNA含量的测定。
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3楼2013-01-11 11:28:44
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platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yanjiwuluo: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-12 15:10:42
那说明你测到的是引物二聚体，而不是你的目的条带哦！
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4楼2013-01-11 17:43:46
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尹祥杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yanjiwuluo: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-12 15:09:28
使你没有跑出来吧。电压也会有关系的。
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众浪大化中，不喜也不惧。
5楼2013-01-11 23:30:59
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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lovelydong at 2013-01-11 11:04:18
首先你的目的基因片段有多大，跟你的marker是不是匹配。另外你样品孔能否看到引物二聚体的条带？

应该与marker匹配的。没有二聚体出现，什么都没有
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6楼2013-01-12 15:08:17
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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 尹祥杰 at 2013-01-11 23:30:59
使你没有跑出来吧。电压也会有关系的。

多少合适呢？我的你、目的基因在1000bp左右把
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7楼2013-01-12 15:09:23
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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by platanus at 2013-01-11 17:43:46
那说明你测到的是引物二聚体，而不是你的目的条带哦！

这说明我要再提高退火温度吗？有几个有条带但是很弱
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8楼2013-01-12 15:10:33
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cory0931

至尊木虫 (文坛精英)

巫山云
怀疑没有扩出来；
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锤之千古
9楼2013-01-13 19:36:37
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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cory0931 at 2013-01-13 19:36:37
怀疑没有扩出来；

的确没扩增出来，唉，郁闷，难道引物的事？怎么老出问题
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10楼2013-01-14 20:40:55
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