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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)

[求助] PCR

战友们，我用PCR扩增一下我的目的基因，扩增完成后，我用微量核酸测定仪测出来的OD260/280=1.8左右，浓度700ng/ul。但是跑胶时为什么只有marker。目的基因一点都没有
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1楼 2013-01-11 10:41:23
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yanjiwuluo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cory0931 at 2013-01-13 19:36:37
怀疑没有扩出来；

的确没扩增出来，唉，郁闷，难道引物的事？怎么老出问题
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10楼2013-01-14 20:40:55
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lovelydong

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yanjiwuluo: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-12 15:08:22
首先你的目的基因片段有多大，跟你的marker是不是匹配。另外你样品孔能否看到引物二聚体的条带？
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2楼2013-01-11 11:04:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
700ng/ul浓度很高了，跑胶应该可以明显看到的。PCR时的模板没有加多吧？样品如果大量形成引物二聚体也会影响DNA含量的测定。
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3楼2013-01-11 11:28:44
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platanus

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yanjiwuluo: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-12 15:10:42
那说明你测到的是引物二聚体，而不是你的目的条带哦！
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4楼2013-01-11 17:43:46
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