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yingwuzhe25

新虫 (正式写手)

[求助] 求助分子生物学技术

1.如何在“体内”设计实验确定细胞某一生理活动与两个大分子的“直接”相互作用有关？
2.如何寻找某一转录因子在“体内”所结合的启动子位点？
小弟跨专业，有些问题还不懂，恳请知道的高手能够给予解答，谢谢！
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1楼 2013-01-10 19:56:20
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 斑斑辛苦了 2013-01-11 08:05:14
yingwuzhe25: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-13 19:53:04
1.如何在“体内”设计实验确定细胞某一生理活动与两个大分子的“直接”相互作用有关？
答：可以用BIFC来验证或者FRET技术来验证

a 双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation，BiFC)分析技术，是由Hu等在2002年最先报道的一种直观、快速地判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术.该技术巧妙地将荧光蛋白分子的两个互补片段分别与目标蛋白融合表达，如果荧光蛋白活性恢复则表明两目标蛋白发生了相互作用.其后发展出的多色荧光互补技术(multicolor BiFC)，不仅能同时检测到多种蛋白质复合体的形成，还能够对不同蛋白质间产生相互作用的强弱进行比较.目前，该技术已用于转录因子，G蛋白βγ亚基的二聚体形式，不同蛋白质间产生相互作用强弱的比较以及蛋白质泛素化等方面的研究工作上.

b. 荧光能量共振转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)是较早发展起来的一门技术，随着绿色荧光蛋白应用技术的发展，FRET已经成为检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具，在生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等方面有着广泛的应用。
(以上内容a&b来源于网络)

2.如何寻找某一转录因子在“体内”所结合的启动子位点？
答：可以做Chip on CHIP

      CHIP是染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay ）的缩写，这个东西是目前唯一的研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。
    CHIP-on-chip就是先用特异性抗体把目的组蛋白特异地沉淀下来，当然也包括上面缠绕的DNA，再把DNA单独拿出来去扩增，最后再上芯片，就是这么个过程咯。
另附这个技术哦wiki链接：http://en.wikipedia.org/wiki/ChIP-on-chip
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-01-10 22:32:19
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yingwuzhe25

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-01-10 22:32:19
1.如何在“体内”设计实验确定细胞某一生理活动与两个大分子的“直接”相互作用有关？
答：可以用BIFC来验证或者FRET技术来验证

a 双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation，BiFC)分析技术，是 ...

谢谢您，还想请问下，我第一道题中说的是在“体内”设计实验确定细胞某一生理活动与两个大分子的“直接”相互作用有关，我的意思是说您只传授了蛋白质体内互作，有没有DNA和蛋白质也有类似情况，检测方法又是什么？还麻烦您能再不吝赐教，谢谢！
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3楼2013-01-13 19:54:58
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