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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 长片段的连接转化问题，望大侠们赐教！
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ym6104

金虫 (小有名气)

[求助] 长片段的连接转化问题，望大侠们赐教！

新手一枚，现在在扩两个3000bp左右的基因，做TA克隆，PCR的条带很亮，胶回收后跑琼脂糖检测条带也挺亮，用的是TAKARA 的LA TAQ，之后用TAKARA的PMD-19连接过夜，再用全式金的T1感受态转化，涂板之后也长菌了，但没有之前扩短片段的时候多，做菌落PCR检测却什么条带也没有。现在觉得是片段太长没有连接上，所以想请教一下各位，有什么改进的办法吗？还是说得分段扩增，那分段的话在分的片段的太小和引物设计上有什么要求吗？
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1楼 2013-01-10 19:32:34
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kangqx2212

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接测序吧，两头测一个反应先。
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7楼2013-01-10 22:26:13
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