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478203301

金虫 (小有名气)

[求助] pcDNA3.1的ABC有什么区别

pcDNA3.1载体分了ABC三型,在构建时这三种载体有什么区别?目的基因插入pcDNA3.1ABC三型之后有无区别,读框是否错位?
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gyesang

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【答案】应助回帖

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478203301: 金币+5, 有帮助 2013-01-10 17:06:00
很多表达载体都分了ABC,特别是N端带tag的载体,主要区别在MCS各有一个碱基的错位,如果你手上ABC三种载体都有的话,你设计基因上游引物的时候,你不用考虑对读码框的问题,因为3种质粒当中肯定会有一个适合,然后就选适合的那个载体来构建载体,如果你只有3个当中的一个,那就要根据你有的那个载体来设计引物,同时考虑基因融合和对读码框的问题
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-01-10 14:21:56
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478203301

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-01-10 14:21:56
很多表达载体都分了ABC,特别是N端带tag的载体,主要区别在MCS各有一个碱基的错位,如果你手上ABC三种载体都有的话,你设计基因上游引物的时候,你不用考虑对读码框的问题,因为3种质粒当中肯定会有一个适合,然后就 ...

谢谢你的答复,我还有一个疑问,怎么确定哪个是适合的呢?读码框就是从我们插入序列的ATG开始的,那还怎么考虑对读码框的影响呢?
3楼2013-01-10 18:00:00
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gyesang

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 478203301 at 2013-01-10 18:00:00
谢谢你的答复,我还有一个疑问,怎么确定哪个是适合的呢?读码框就是从我们插入序列的ATG开始的,那还怎么考虑对读码框的影响呢?...

印象中pcDNA3.1载体是没有ABC之分,倒有+ 或者 - 载体,

pcDNA3.1 N端好像不带tag,所以就无所谓考虑读码框的问题了,考虑读码框的问题是你在构建带N端或者C端tag的时候需要考虑,但有N端tag的时候,翻译是从Tag的那个ATG开始的,然后才是你的基因,因此tag到你基因ATG之间的序列要是3的倍数,否知翻译会发生移码
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4楼2013-01-10 22:07:00
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