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478203301

金虫 (小有名气)

[求助] pcDNA3.1的ABC有什么区别

pcDNA3.1载体分了ABC三型，在构建时这三种载体有什么区别？目的基因插入pcDNA3.1ABC三型之后有无区别，读框是否错位？
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1楼 2013-01-10 12:00:48
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gyesang

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【答案】应助回帖

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478203301: 金币+5, ★有帮助 2013-01-10 17:06:00
很多表达载体都分了ABC，特别是N端带tag的载体，主要区别在MCS各有一个碱基的错位，如果你手上ABC三种载体都有的话，你设计基因上游引物的时候，你不用考虑对读码框的问题，因为3种质粒当中肯定会有一个适合，然后就选适合的那个载体来构建载体，如果你只有3个当中的一个，那就要根据你有的那个载体来设计引物，同时考虑基因融合和对读码框的问题
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2楼2013-01-10 14:21:56
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478203301

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-01-10 14:21:56
很多表达载体都分了ABC，特别是N端带tag的载体，主要区别在MCS各有一个碱基的错位，如果你手上ABC三种载体都有的话，你设计基因上游引物的时候，你不用考虑对读码框的问题，因为3种质粒当中肯定会有一个适合，然后就 ...

谢谢你的答复，我还有一个疑问，怎么确定哪个是适合的呢？读码框就是从我们插入序列的ATG开始的，那还怎么考虑对读码框的影响呢？
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3楼2013-01-10 18:00:00
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gyesang

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 478203301 at 2013-01-10 18:00:00
谢谢你的答复，我还有一个疑问，怎么确定哪个是适合的呢？读码框就是从我们插入序列的ATG开始的，那还怎么考虑对读码框的影响呢？...

印象中pcDNA3.1载体是没有ABC之分，倒有+ 或者 - 载体，

pcDNA3.1 N端好像不带tag，所以就无所谓考虑读码框的问题了，考虑读码框的问题是你在构建带N端或者C端tag的时候需要考虑，但有N端tag的时候，翻译是从Tag的那个ATG开始的，然后才是你的基因，因此tag到你基因ATG之间的序列要是3的倍数，否知翻译会发生移码
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4楼2013-01-10 22:07:00
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