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天使1Q86之城

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切连接

第一步:从测序成功的质粒上酶切出目的基因,凝胶回收。
第二步:把质粒35S-GFP-1300酶切出同样的酶切位点,凝胶回收。
第三部:用高效连接酶连接后转化DH5a
结果:转化效率很高,但是没有阳性克隆。
正常来说只要是阳性克隆就应该没有问题的,但是···为什么总是不对呢?
最近做的甚是苦逼,诸位大侠帮帮小弟吧。
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金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我都用的takara的酶,没必要通宵啊,两小时就行了,浪费时间的,不同时段也没必要,够个载体很简单的东东没必要那么烦的。单酶切的话载体酶切完加个CIAP37℃十分钟就行了。双酶切一般不会有多大问题吧,不过有时候双酶切也需要加个CIAP脱磷酸化一下的。
14楼2013-01-12 16:18:18
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