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天使1Q86之城

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切连接

第一步:从测序成功的质粒上酶切出目的基因,凝胶回收。
第二步:把质粒35S-GFP-1300酶切出同样的酶切位点,凝胶回收。
第三部:用高效连接酶连接后转化DH5a
结果:转化效率很高,但是没有阳性克隆。
正常来说只要是阳性克隆就应该没有问题的,但是···为什么总是不对呢?
最近做的甚是苦逼,诸位大侠帮帮小弟吧。
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒35S-GFP-1300是双酶切还是单酶切?切下来的小片段是多长?电泳条带清楚吗?你这样的情况,八成是大质粒没有切动,所以转化后长的斑很多,缺没有你的目的条带。还有检查下你的感受态有没有问题。
15楼2013-01-12 17:12:11
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