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procson

新虫 (初入文坛)


[求助] 急 请教

请问 我用高保真的聚合酶 分别扩增出A片段(1.5k),B片段(3.5K),中间重叠的碱基有25个,利用同样的酶Overlap PCR 确 扩增不出来,请问可能是什么原因呢,我做了很久都没扩增出来
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的片段太大,非常不容易。个人不建议你继续尝试OVerlap, 还是用其他方法吧。这么大的片段中间应该有其他的酶切位点, 分成小片段再做吧。这样可能比你摸很长时间条件要快。
shine
3楼2013-01-09 12:36:25
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
overlap PCR效率一般不是很高,再加上5K的片段有时候本身就不是特别好P,再试试优化PCR的条件。
2楼2013-01-09 08:20:56
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