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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 急 请教
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procson

新虫 (初入文坛)

[求助] 急 请教

请问 我用高保真的聚合酶 分别扩增出A片段（1.5k），B片段（3.5K），中间重叠的碱基有25个，利用同样的酶Overlap PCR 确 扩增不出来，请问可能是什么原因呢，我做了很久都没扩增出来
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1楼 2013-01-08 23:12:46
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
overlap PCR效率一般不是很高，再加上5K的片段有时候本身就不是特别好P，再试试优化PCR的条件。
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2楼2013-01-09 08:20:56
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的片段太大，非常不容易。个人不建议你继续尝试OVerlap， 还是用其他方法吧。这么大的片段中间应该有其他的酶切位点， 分成小片段再做吧。这样可能比你摸很长时间条件要快。
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shine
3楼2013-01-09 12:36:25
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