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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何扩增某一功能蛋白的未知基因
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monica_1436

木虫 (初入文坛)

[求助] 如何扩增某一功能蛋白的未知基因

已知某动物的某功能性蛋白，不知道该蛋白的氨基酸序列和基因序列，在GENEBANK上也没有检索到与其同源性较高的动物或蛋白序列，想要扩增出该蛋白的基因序列，求高手指点！！
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老旺夫了
1楼 2013-01-07 10:31:49
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

不知道氨基酸序列，只要知道基因序列，甚至于部分基因序列就可以扩增，只要能够把该基因提取出来，接上强启动子就很容易扩增。部分基因序列提取该基因，可以用基因组文库，反向PCR就可以提出该基因全序列，然后导入质粒载体，装入（制备细菌感受态、电传导、病毒传导、显微注射）工程细胞高效表达即可。可以在构建载体时在N末端接上His6基因，然后用Ni亲和层析柱提出以富集。
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15楼2013-04-15 15:32:06
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力亮

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你说的咋这么模糊啊？知道功能却不知道基因，咋知道的功能啊？肯定有相应已经报道的了。你还是再看看吧。
你是想搞第一个吃螃蟹的人啊？呵呵   那你还是小心点啊！
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突然间的自我
2楼2013-01-07 13:33:41
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
通过蛋白的氨基酸序列设计简并引物。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-01-07 14:31:35
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monica_1436

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 力亮 at 2013-01-07 13:33:41
你说的咋这么模糊啊？知道功能却不知道基因，咋知道的功能啊？肯定有相应已经报道的了。你还是再看看吧。
你是想搞第一个吃螃蟹的人啊？呵呵   那你还是小心点啊！

这么解释吧，干扰素，大家都知道他的存在和功能，但是不同动物确不一样，我想扩增某一动物的干扰素基因，可是没有参照序列，也没有和这个动物同源关系相近的动物可参考，所以是不知道基因序列，也不知氨基酸序列，也不知道同源关系相近的动物动物是什么，怎么办
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老旺夫了
4楼2013-01-07 21:57:30
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