24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 2479  |  回复: 23
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

eagle_edu

金虫 (正式写手)

[求助] 求助 水样中总DNA 的提取!

目前,我用MoBio 强力土壤 DNA 提取试剂盒 PowerSoil™ DNA Isolation Kit 提取油田水样中的微生物总DNA,首先是用0.22的微孔滤膜过滤,然后剪碎加入到试剂盒中,按步骤提取,为什么总是提不出来?实验室室温10-14度,谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiayuhe

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by mizhoulong at 2013-01-08 05:35:52
不会吧,我用国产天根的都没问题。当然不是给天根做广告。

估计就是水样中微生物浓度太低了,如果少于比如10E3,估计难于提取吧?

使用的天根哪一款呢,最近做这个实验,求教
22楼2018-03-13 19:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

cqlsf

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, good! 2013-01-07 19:35:51
eagle_edu: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-08 09:33:47
建议:1看水样中其他杂质是否过多?是否需要初步沉淀除杂、去油污,去除提DNA的干扰?
    2、样品中微生物种群及数量初步估计,数量很多还是极其稀少?是真菌多还是细菌多?G+还是G-? 如果数量极少,需要浓缩富集,是滤膜过滤还是离心沉淀等?
   3、提取出来的DNA有时很稀少,常规电泳看不到,可通过PCR放大看看,紫外光度计看看,到底有没有?  
祝顺利!
老顽虫是大酱油滴:知新,行知,业精于勤。。。木虫的闺蜜叫木马。。
2楼2013-01-07 09:20:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oldflying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
水样提取DNA相对来说还是比较容易的,在2004年的Science上有一篇是做的海洋宏基因组的,对你应该有用,你可以去查一下:《Environmental Genome Shotgun sequencing of The Sargasso Sea》
一个人的努力和坚持!
3楼2013-01-07 13:28:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kiruwa

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
eagle_edu: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-08 09:36:46
我以前用过和你类似方法,也提不出来,建议你可以采用MO BIO 提取水样的kit. 这个土壤kit似乎对水样没用.
请注意,照片不是我本人!!!请不要把此人和我的长相联系到一起去.
4楼2013-01-07 14:02:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见