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eagle_edu

金虫 (正式写手)

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[求助] 求助水样中总DNA 的提取！

目前，我用MoBio 强力土壤 DNA 提取试剂盒 PowerSoil™ DNA Isolation Kit 提取油田水样中的微生物总DNA，首先是用0.22的微孔滤膜过滤，然后剪碎加入到试剂盒中，按步骤提取，为什么总是提不出来？实验室室温10-14度，谢谢！

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1楼 2013-01-07 00:08:10

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benita-chen

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

16楼: Originally posted by fxgowen at 2013-03-19 10:46:48
剪碎滤膜后直接用试剂盒提取貌似不行，我用的土壤试剂盒提取的河水样品，但是在剪碎滤膜后自己配了一个缓冲液超声震荡，之后离心后用沉淀物提取的，你可以试试先超声

请问您是怎么配的缓冲液啊？还有超声震荡条件是什么呢？谢啦

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18楼2014-04-24 10:11:29

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cqlsf

至尊木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, good！ 2013-01-07 19:35:51
eagle_edu: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-08 09:33:47

建议：1看水样中其他杂质是否过多？是否需要初步沉淀除杂、去油污，去除提DNA的干扰？
2、样品中微生物种群及数量初步估计，数量很多还是极其稀少？是真菌多还是细菌多？G+还是G-? 如果数量极少，需要浓缩富集，是滤膜过滤还是离心沉淀等？
3、提取出来的DNA有时很稀少，常规电泳看不到，可通过PCR放大看看，紫外光度计看看，到底有没有？
祝顺利！