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eagle_edu

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3443.6
红花: 3
帖子: 550
在线: 228.7小时
虫号: 782390
注册: 2009-05-29
专业: 生物地球化学

[求助] 求助水样中总DNA 的提取！

目前，我用MoBio 强力土壤 DNA 提取试剂盒 PowerSoil™ DNA Isolation Kit 提取油田水样中的微生物总DNA，首先是用0.22的微孔滤膜过滤，然后剪碎加入到试剂盒中，按步骤提取，为什么总是提不出来？实验室室温10-14度，谢谢！

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1楼 2013-01-07 00:08:10

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shiying_10

银虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 254.9
帖子: 263
在线: 111.6小时
虫号: 745291
注册: 2009-04-10
性别: GG
专业: 环境微生物学

可以多过几张膜，然后洗脱的时候，把几管的样品都上到一根柱子上。水样，相对土样好提一些，只是步骤比较繁琐。

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科研人生

11楼2013-01-20 15:59:29

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cqlsf

至尊木虫 (职业作家)

应助: 20 (小学生)
金币: 14822.6
散金: 193
红花: 4
沙发: 7
帖子: 3089
在线: 256.9小时
虫号: 2216575
注册: 2013-01-01
专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, good！ 2013-01-07 19:35:51
eagle_edu: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-08 09:33:47

建议：1看水样中其他杂质是否过多？是否需要初步沉淀除杂、去油污，去除提DNA的干扰？
2、样品中微生物种群及数量初步估计，数量很多还是极其稀少？是真菌多还是细菌多？G+还是G-? 如果数量极少，需要浓缩富集，是滤膜过滤还是离心沉淀等？
3、提取出来的DNA有时很稀少，常规电泳看不到，可通过PCR放大看看，紫外光度计看看，到底有没有？
祝顺利！