应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 要愁死了，求帮助，筛选转化子的问题
51/1返回列表
查看: 820  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)

[求助] 要愁死了，求帮助，筛选转化子的问题

将目的基因导入pET28a，选了8个单克隆做菌落PCR能P出来，但是提质粒后，用目的基因上的酶切位点酶切，居然切不断，大小和空质粒一样，怎么回事呀？我的目的基因到底有没有导进去？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-04 14:33:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2013-01-07 17:06:41
引用回帖:
8楼: Originally posted by cdmmore at 2013-01-05 09:27:46
PCR用的当初扩增目的基因的引物。
为什么PCR引物都在克隆片段上没有一个在克隆片段上，一个在载体上好呢？...

都在克隆片段上也可以，不过有可能出现克隆片段P出假阳性的可能。如果一个在载体上，一个在目的基因上，假阳性的概率变小，而且保证你筛选的质粒既含有载体又含有目的片段。当然，最好是是象9L那样设计。但是一般的情况是你有克隆目的片段的引物，载体有通用引物，所以我说的这种引物组合是现成的，不需要另行设计。
赞一下 回复此楼
10楼2013-01-05 12:49:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+1, ★有帮助 2013-01-04 15:50:21
一切以酶切结果为准，你是切不开呢，还是切开了，但是大小与空质粒一样，如果是后者的话，很明显，没有导进去，菌落PCR假阳性.
赞一下 回复此楼
Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2013-01-04 15:17:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+1, ★有帮助 2013-01-04 15:50:33
菌落PCR有假阳性的，既然提质粒酶切鉴定不符合，肯定是不对的，要么多筛，要么从新克隆。
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-04 15:32:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2013-01-04 15:17:58
一切以酶切结果为准，你是切不开呢，还是切开了，但是大小与空质粒一样，如果是后者的话，很明显，没有导进去，菌落PCR假阳性.

是切不开。请教一下菌落PCR怎么来的假阳性呢，我挑了8个克隆都能P出来，但都切不开
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-04 15:49:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭