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WAX2010银虫 (小有名气)
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[交流]
我可能发现了一种新奇的生物发光现象 已有19人参与
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实验过程中发现了一个新奇的发光现象，想研究一下却不知从何入手，希望各位前辈为我指点迷津。 我是细胞生物学专业的一名学生，平日主要从事细菌展示技术的研究，所用的细菌是大肠杆菌MC1061，内部有一个可诱导表达GFP和CM抗性的表达载体。实验过程中需要对细菌离心和清洗，我一般采用3000g，5min离心，离心后会把上清的LB倒到一个小废液缸里，清洗用的PBS也会倒入这个废液缸，偶尔少量的菌液也会倒入此废液缸，由于实验比较忙，废液缸里的废液并非天天处理，有时候我看到里面浑浊或者表面漂了一层微生物，我都会加入新吉尔灭或者75%的酒精灭菌。前段时间有一次，我加入酒精后摇了摇，发现本来微黄的液体变成了蓝绿色，我感觉很新奇但也没太在意，就把废液处理掉了，并把废液缸用清水涮了涮。接下来一次废液中加了一点75%酒精后又出现了一样的现象。一开始我想是不是里面污染了其他的细菌或真菌，便把废液吸出来，3000g，5min离心，可见有白色的细菌离下来，但上清依然是蓝色的，我把蓝色的上清放到紫外灯下，可以看到有很亮的蓝白色荧光，而离心下来的细菌，PBS重悬后却看不到荧光，即使将我们诱导GFP表达的菌PBS重悬后在紫外灯下也是看不到荧光的。我想上清有蛋白？我又把上清10000g，5min离心，并没有看到有任何东西离心下来。因此上清中是不是产生了一种新的发光物质。我对这个现象很感兴趣，因此把废液收集了起来。放置了一夜后蓝绿色又变成了浅黄色，振荡摇动液体，液体慢慢从浅黄色变成浅蓝色又变成蓝绿色（以上现象可能说明变成蓝色液体与酒精无关），而且随着放置时间的延长，里面长起来的菌越来越多，摇动液体使其由黄色变成蓝绿色花的时间也越来越长，这是不是说明里面某种物质在有氧存在的情况下可以发出蓝光？但是我离心收集的上清放在EP管中一直是浅蓝色的呀，颜色的变化也不一定依赖氧的存在，还是二氧化碳的存在抑制了蓝绿色的显现。上网查到有发光细菌，我看到的现象与发光细菌不同，发光细菌是在黑暗中看到光，而我观察到的是在可见光下有蓝绿色，紫外激发下也可产生荧光。 我也试图从这个废液中挑出感兴趣的菌，我先取出少量废液，加入到含有CM的LB中，发现菌长的很慢，而且长起来后，怎么摇动也没有看到变色的现象，放在紫外灯下也没看到有很强的荧光。 我又取了一点废液到无CM的LB中，菌长的还可以，就是也没看到变色现象？ 下一步该怎么办呢？？ 希望大家多多指点，谢谢 [ Last edited by WAX2010 on 2013-1-3 at 14:30 ] 谢谢大家的建议，由于老板反对进行尝试研究，菌种已被处理了…… [ Last edited by WAX2010 on 2013-10-8 at 14:42 ] |
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WAX2010
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现象非常有意思。你确定发光的是菌本身吗？从你的描述感觉是photoreceptor。很多生物都有的，只是含量有限。我感觉还是和你倒在里面的工程菌和其上清直接相关的。我不知道为什么你的菌在紫外下没有荧光。我做的荧光基因载体宿主可以在紫外下检测到的。有些荧光的颜色特殊，还能直接用肉眼看到。 因为你的发光物质已经在上清里面了，我觉得你可以试试纯化发光物质，对其结构进行鉴定，分析是什么东西，然后再分析大量产生它的原因。 |
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| 我觉得你观察到的现象非常有趣，很有可能是某种会分泌到培养液中的物质（可能是蛋白质，或者化学物质），而非微生物；3000g是可以离心下大部分细菌的，而10000g并不能离去蛋白质；既然能观察到较强的光，说明这种物质含量较高，可尝试对其进行分离、鉴定。我觉得有几个细节需要你注意：1、你在可见光下观察到的颜色变化和紫外激发下的荧光是否为一种东西（光还是颜色变化？是否是同一波长的发射光？），2、发光现象是否不依赖酒精和氧气（乙醇和氧气分别做电子供体和受体？）。还有一点儿，发光细菌的发光并不一定在黑暗中，却依赖于一些还原性物质。 |
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