应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 我可能发现了一种新奇的生物发光现象
251/3返回列表123下一页
查看: 4063  |  回复: 50
查看全部回帖@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

WAX2010

银虫 (小有名气)

[交流] 我可能发现了一种新奇的生物发光现象已有19人参与

实验过程中发现了一个新奇的发光现象，想研究一下却不知从何入手，希望各位前辈为我指点迷津。
我是细胞生物学专业的一名学生，平日主要从事细菌展示技术的研究，所用的细菌是大肠杆菌MC1061，内部有一个可诱导表达GFP和CM抗性的表达载体。实验过程中需要对细菌离心和清洗，我一般采用3000g，5min离心，离心后会把上清的LB倒到一个小废液缸里，清洗用的PBS也会倒入这个废液缸，偶尔少量的菌液也会倒入此废液缸，由于实验比较忙，废液缸里的废液并非天天处理，有时候我看到里面浑浊或者表面漂了一层微生物，我都会加入新吉尔灭或者75%的酒精灭菌。前段时间有一次，我加入酒精后摇了摇，发现本来微黄的液体变成了蓝绿色，我感觉很新奇但也没太在意，就把废液处理掉了，并把废液缸用清水涮了涮。接下来一次废液中加了一点75%酒精后又出现了一样的现象。一开始我想是不是里面污染了其他的细菌或真菌，便把废液吸出来，3000g，5min离心，可见有白色的细菌离下来，但上清依然是蓝色的，我把蓝色的上清放到紫外灯下，可以看到有很亮的蓝白色荧光，而离心下来的细菌，PBS重悬后却看不到荧光，即使将我们诱导GFP表达的菌PBS重悬后在紫外灯下也是看不到荧光的。我想上清有蛋白？我又把上清10000g，5min离心，并没有看到有任何东西离心下来。因此上清中是不是产生了一种新的发光物质。我对这个现象很感兴趣，因此把废液收集了起来。放置了一夜后蓝绿色又变成了浅黄色，振荡摇动液体，液体慢慢从浅黄色变成浅蓝色又变成蓝绿色（以上现象可能说明变成蓝色液体与酒精无关），而且随着放置时间的延长，里面长起来的菌越来越多，摇动液体使其由黄色变成蓝绿色花的时间也越来越长，这是不是说明里面某种物质在有氧存在的情况下可以发出蓝光？但是我离心收集的上清放在EP管中一直是浅蓝色的呀，颜色的变化也不一定依赖氧的存在，还是二氧化碳的存在抑制了蓝绿色的显现。上网查到有发光细菌，我看到的现象与发光细菌不同，发光细菌是在黑暗中看到光，而我观察到的是在可见光下有蓝绿色，紫外激发下也可产生荧光。
我也试图从这个废液中挑出感兴趣的菌，我先取出少量废液，加入到含有CM的LB中，发现菌长的很慢，而且长起来后，怎么摇动也没有看到变色的现象，放在紫外灯下也没看到有很强的荧光。
我又取了一点废液到无CM的LB中，菌长的还可以，就是也没看到变色现象？
下一步该怎么办呢？？
希望大家多多指点，谢谢

[ Last edited by WAX2010 on 2013-1-3 at 14:30 ]

谢谢大家的建议，由于老板反对进行尝试研究，菌种已被处理了……

[ Last edited by WAX2010 on 2013-10-8 at 14:42 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

化学污染与环境健康 考研经验 只是感兴趣 细菌表面展示

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
大手牵小手
1楼2013-01-03 14:28:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WAX2010

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-03 16:26:24
现象非常有意思。你确定发光的是菌本身吗？从你的描述感觉是photoreceptor。很多生物都有的，只是含量有限。我感觉还是和你倒在里面的工程菌和其上清直接相关的。我不知道为什么你的菌在紫外下没有荧光。我做的荧光 ...

1. 发光的应该不是菌，因为3000g,5min离心后，荧光并没有减弱很多，但也有一点点变弱，减弱不知是不是因为菌的折射造成光强改变。
2. GFP最佳激发应该在488nm左右，是不是紫外激发不合适
3. 因为不是做这个方面的，不知如何纯化鉴定呢，老板或许也不愿在这方面投钱吧
谢谢指点
赞一下 回复此楼
大手牵小手
10楼2013-01-04 20:12:39
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WAX2010

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by huihui37 at 2013-01-03 20:40:31
我是做发光细菌方向的。我是用4000g离心15min得到菌体的。我培养的菌体放入密闭环境中，有微弱的光，但是震荡后颜色会加深。白天基本看不到荧光，放在暗处荧光会比较强的。看你的推断是不是化学物质引起的？你可以加 ...

我看到的是菌液震荡后从黄色变成了蓝绿色，应该不是加深的缘故，放到暗处也没有看到有荧光，离心后上清依然有荧光，所以推测是不是菌产生了什么物质
赞一下 回复此楼
大手牵小手
11楼2013-01-04 20:15:59
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WAX2010

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-01-03 21:29:10
我觉得你观察到的现象非常有趣，很有可能是某种会分泌到培养液中的物质（可能是蛋白质，或者化学物质），而非微生物；3000g是可以离心下大部分细菌的，而10000g并不能离去蛋白质；既然能观察到较强的光，说明这种物 ...

1.我也推测是分泌到培养基里的一些物质，可是不知如何分离鉴定呢，因为我们课题组不做这方面的研究，老板或许不愿意花钱在这上面，有没有一些简单易行的纯化方面（勿笑，菜鸟，嘿嘿）
2.我看了一下，振荡之后肉眼可见的颜色变化似乎对荧光并没有太大的影响，或许是肉眼判断不准
3.我重新接种了一点，养了一天一夜后，菌摇起来了，振荡是可以是菌液变色的，因此可以断定与乙醇无关
谢谢指点
赞一下 回复此楼
大手牵小手
12楼2013-01-04 20:22:27
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WAX2010

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 雨轩36 at 2013-01-03 23:50:22
祝贺楼主！^_^)Y发现问题是成功之母啊，就再多做几次实验，把实验细节控制好、分析好，对其他可能引起颜色反应的因素逐个排除，抓住核心因素。现在只是发现这个问题存在，接下来去弄清楚如何存在需要更加细致与耐心 ...

谢谢您的鼓励，也愿您实验顺利开心
赞一下 回复此楼
大手牵小手
13楼2013-01-04 20:23:25
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WAX2010

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by toya at 2013-01-04 00:10:31
海里的有些生物会发光，你看看life of pi

嗯，看过了，很漂亮
回复此楼
大手牵小手
14楼2013-01-04 20:23:42
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WAX2010

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 克隆大虾 at 2013-01-04 00:19:25
有可能是合成的化合物。和培养基 培养条件有关..

我推测也可能是合成的某种物质
赞一下 回复此楼
大手牵小手
15楼2013-01-04 20:24:16
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WAX2010

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by tmoonday at 2013-01-04 00:35:51
加酒精和不加酒精是否有区别？取少量废液加入LB摇，检测时有没有加酒精。有条件做个HPLC，看看是什么物质

我取了少量废液在LB中摇了一天一夜，不加酒精振荡也可以看到变色，说明与酒精无关，条件有限，可能做不了HPLC,不知还有没有更简单点的分离方法
谢谢指点
赞一下 回复此楼
大手牵小手
16楼2013-01-04 20:26:10
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WAX2010

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 明亮奥义 at 2013-01-04 17:25:18
我！支持你，有细心和好奇心，一定会很成功的

多谢多谢
回复此楼
大手牵小手
17楼2013-01-04 20:28:41
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WAX2010

银虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-01-04 20:46:13
我的意思是，你认为的发光现象，是否真的是发光，而不是某种物质的颜色变化；在黑暗中看一下是否发光就清楚了。我估计是蛋白质，而这样的物质一般都是用液相分离的，然后做进一步的鉴定。如果没有相关仪器，可以自 ...

我看了一下，黑暗中不发光，看来我说是生物发光是不正确的，多谢多谢
赞一下 回复此楼
大手牵小手
19楼2013-01-04 21:01:30
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 WAX2010 的主题更新
251/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭