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新虫 (初入文坛)

[求助] 考马斯亮蓝扣除空白 已有1人参与

各位大神,你们用考马斯亮蓝测吸光度是测一个范围(400-650nm),还是就测595nm一个点啊。
我的空白是:1ml去离子水+5ml考马斯亮蓝
考马斯亮蓝配制:100mg考马斯亮蓝+50ml无水乙醇+100ml85%磷酸,定容至100ml,过滤备用
问题:为了保险起见,我都是测一个范围的(400-650nm)但在扣除空白时,扣除后,比色皿不拿出来,继续测,550-650处吸光度会上漂,每2min测一下,随时间推移,漂移更厉害,说明参比都是不稳定的,求有经验大神指导下是什么原因
并且测标准曲线时,最大吸收在585nm附近,不是595nm
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日尧.com

新虫 (初入文坛)

考马斯亮蓝G250,测蛋白质含量的
2楼2013-01-05 12:40:20
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httarea

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 应助指数+1 2013-12-24 18:10:38
我也出现了这个问题,参比是不稳定,但一分钟变化幅度很小,也就0.001,所以可以忽略。主要还是蛋白质跟考马斯亮蓝反应时间不同会出现不同效果。你可以固定一个时间点测,比如都定反应10min后开始测。而且测两个样的话最好之间洗一下比色皿
失败乃成功之母
3楼2013-12-24 10:48:33
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