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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 考马斯亮蓝扣除空白
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日尧.com

新虫 (初入文坛)

[求助] 考马斯亮蓝扣除空白 已有1人参与

各位大神，你们用考马斯亮蓝测吸光度是测一个范围（400-650nm）,还是就测595nm一个点啊。
我的空白是：1ml去离子水+5ml考马斯亮蓝
考马斯亮蓝配制：100mg考马斯亮蓝+50ml无水乙醇+100ml85%磷酸，定容至100ml，过滤备用
问题：为了保险起见，我都是测一个范围的（400-650nm）但在扣除空白时，扣除后，比色皿不拿出来，继续测，550-650处吸光度会上漂，每2min测一下，随时间推移，漂移更厉害，说明参比都是不稳定的，求有经验大神指导下是什么原因
并且测标准曲线时，最大吸收在585nm附近，不是595nm
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1楼 2012-12-31 15:32:35
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日尧.com

新虫 (初入文坛)
考马斯亮蓝G250，测蛋白质含量的
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2楼2013-01-05 12:40:20
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httarea

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 应助指数+1 2013-12-24 18:10:38
我也出现了这个问题，参比是不稳定，但一分钟变化幅度很小，也就0.001，所以可以忽略。主要还是蛋白质跟考马斯亮蓝反应时间不同会出现不同效果。你可以固定一个时间点测，比如都定反应10min后开始测。而且测两个样的话最好之间洗一下比色皿
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失败乃成功之母
3楼2013-12-24 10:48:33
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