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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆求助
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湘雨儿1

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆求助

用pGEM@-T载体做克隆，DNA浓度最小要多少呢，为什么我做的蓝白斑假阳性那么多，感受态细胞的量和复苏是加培养基的量影响很大吗？按照说明书上的结果一般会最好吗？
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1楼 2012-12-31 09:54:58
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lxbxk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA的浓度没有要求，连接产物和载体的摩尔比在10：1的时候比较好，反正有一点必须保证连接产物的摩尔数一定要高于载体的摩尔数，假阳性高还有一个原因就是抗生素的抗性或者晒蓝白班的那个试剂有可能失效，或者你没有避光什么的也可能会导致。。。
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做开心的自己，加油
9楼2013-01-02 10:55:45
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
少加质粒，多加产物，假阳性会少吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2012-12-31 10:14:25
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nangyingyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA浓度没有很高的要求，适量就行
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3楼2012-12-31 10:23:56
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湘雨儿1

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2012-12-31 10:14:25
少加质粒，多加产物，假阳性会少吧。

我已经加了很多的产物了，3.4uL 产物和0.8uL载体
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4楼2012-12-31 10:23:58
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