24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 587  |  回复: 8

湘雨儿1

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆求助

用pGEM@-T载体做克隆,DNA浓度最小要多少呢,为什么我做的蓝白斑假阳性那么多,感受态细胞的量和复苏是加培养基的量影响很大吗?按照说明书上的结果一般会最好吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
少加质粒,多加产物,假阳性会少吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2012-12-31 10:14:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nangyingyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
DNA浓度没有很高的要求,适量就行
3楼2012-12-31 10:23:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

湘雨儿1

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2012-12-31 10:14:25
少加质粒,多加产物,假阳性会少吧。

我已经加了很多的产物了,3.4uL 产物和0.8uL载体
4楼2012-12-31 10:23:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

湘雨儿1

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by nangyingyuan at 2012-12-31 10:23:56
DNA浓度没有很高的要求,适量就行

我的OD值只有2~3之间也没问题吗?
5楼2012-12-31 10:42:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


湘雨儿1: 金币+1 2012-12-31 12:16:54
引用回帖:
4楼: Originally posted by 湘雨儿1 at 2012-12-31 10:23:58
我已经加了很多的产物了,3.4uL 产物和0.8uL载体...

那你有百分之多少假的?10微升体系,我就加0.5微升载体。
6楼2012-12-31 11:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
T-vector放久了也会自连的。如果你假阳性多可能是载体不好了。
7楼2012-12-31 13:21:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greenygreen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蓝白斑本来就不靠谱。。。还有就是纠正下上面的回复,加入量不是看体积,而是看摩尔数。根据你的T载体和你要连进去的目的片段的分子量和浓度,计算出摩尔数。根据,目的片段:载体=1:6或者1:10的相对量构建连接体系。才能保障连接的效率和重组子的数量。这也是TAKARA T4 DNA ligase说明书上要求的。
8楼2013-01-02 10:42:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxbxk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
DNA的浓度没有要求,连接产物和载体的摩尔比在10:1的时候比较好,反正有一点必须保证连接产物的摩尔数一定要高于载体的摩尔数,假阳性高还有一个原因就是抗生素的抗性或者晒蓝白班的那个试剂有可能失效,或者你没有避光什么的也可能会导致。。。
做开心的自己,加油
9楼2013-01-02 10:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 湘雨儿1 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿 江南大学 085602 化工专硕 338分求调剂 +8 路痴小琪 2026-04-05 8/400 2026-04-05 16:25 by imissbao
[考研] 329求调剂 +16 miaodesi 2026-04-02 19/950 2026-04-05 13:11 by gaoxiaoniuma
[考研] 生物工程求调剂 +6 喜欢还是不甘心 2026-04-05 6/300 2026-04-05 10:28 by 唐沐儿
[考研] 313求调剂 +3 海日海日 2026-04-04 3/150 2026-04-05 07:48 by 544594351
[考研] 26考研调剂0710 0860 +9 补补不补 2026-04-03 14/700 2026-04-04 23:32 by 果冻大王
[考研] 290求调剂 +7 luoziheng 2026-04-04 7/350 2026-04-04 23:17 by lqwchd
[考研] 求调剂 +7 xzghyuj 2026-04-04 7/350 2026-04-04 22:25 by oooqiao
[考研] 0835学硕299求调剂 08大类可接受 +5 useryy 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:07 by 蓝云思雨
[考研] 303求调剂 +9 DLkz1314. 2026-03-30 9/450 2026-04-03 18:34 by ls刘帅
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:28 by jiouuu
[考研] 313求调剂 +3 ~微微凉~ 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:25 by 啵啵啵0119
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-02 9/450 2026-04-03 11:12 by wanwan00
[考研] 调剂 +3 osbbx 2026-04-02 3/150 2026-04-03 07:47 by cc8418
[考研] 材料求调剂 +10 呢呢妮妮 2026-04-01 13/650 2026-04-02 09:17 by olim
[考研] 化学工程专硕324分,一志愿中国矿业大学求调剂 +7 耿耿1314 2026-04-01 7/350 2026-04-02 07:40 by 尚水阁主
[考研] 310分求调剂 +4 成功上岸wang 2026-04-01 4/200 2026-04-01 20:35 by liu823948201
[考研] 085600,321分求调剂 +13 大馋小子 2026-03-31 13/650 2026-04-01 12:35 by chemdavid
[考研] 考研材料工程351分调剂 +5 整个好的 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:36 by topgun2009
[考研] 370求调剂 +3 080700调剂 2026-03-30 3/150 2026-03-31 01:09 by A_Zhe
[考研] 085602 化学工程专硕 340分求调剂 +4 qianbai11 2026-03-29 4/200 2026-03-30 11:34 by 唐沐儿
信息提示
请填处理意见