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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆求助
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湘雨儿1

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆求助

用pGEM@-T载体做克隆，DNA浓度最小要多少呢，为什么我做的蓝白斑假阳性那么多，感受态细胞的量和复苏是加培养基的量影响很大吗？按照说明书上的结果一般会最好吗？
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1楼 2012-12-31 09:54:58
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greenygreen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蓝白斑本来就不靠谱。。。还有就是纠正下上面的回复，加入量不是看体积，而是看摩尔数。根据你的T载体和你要连进去的目的片段的分子量和浓度，计算出摩尔数。根据，目的片段：载体=1:6或者1:10的相对量构建连接体系。才能保障连接的效率和重组子的数量。这也是TAKARA T4 DNA ligase说明书上要求的。
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8楼2013-01-02 10:42:05
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
少加质粒，多加产物，假阳性会少吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2012-12-31 10:14:25
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nangyingyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA浓度没有很高的要求，适量就行
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3楼2012-12-31 10:23:56
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湘雨儿1

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2012-12-31 10:14:25
少加质粒，多加产物，假阳性会少吧。

我已经加了很多的产物了，3.4uL 产物和0.8uL载体
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4楼2012-12-31 10:23:58
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