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湘雨儿1

金虫 (小有名气)

[求助] 克隆求助

用pGEM@-T载体做克隆,DNA浓度最小要多少呢,为什么我做的蓝白斑假阳性那么多,感受态细胞的量和复苏是加培养基的量影响很大吗?按照说明书上的结果一般会最好吗?
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greenygreen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蓝白斑本来就不靠谱。。。还有就是纠正下上面的回复,加入量不是看体积,而是看摩尔数。根据你的T载体和你要连进去的目的片段的分子量和浓度,计算出摩尔数。根据,目的片段:载体=1:6或者1:10的相对量构建连接体系。才能保障连接的效率和重组子的数量。这也是TAKARA T4 DNA ligase说明书上要求的。
8楼2013-01-02 10:42:05
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
少加质粒,多加产物,假阳性会少吧。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2012-12-31 10:14:25
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nangyingyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
DNA浓度没有很高的要求,适量就行
3楼2012-12-31 10:23:56
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湘雨儿1

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2012-12-31 10:14:25
少加质粒,多加产物,假阳性会少吧。

我已经加了很多的产物了,3.4uL 产物和0.8uL载体
4楼2012-12-31 10:23:58
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