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qingsong35

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[求助] QPCR自己优化可行吗不买商业试剂盒

用Taqman探针做QPCR
如果不用商业试剂盒
而是自己买的酶 buffer dNTP Mg离子来优化的话
效果如何或者说这样可行吗

如果可行话这几项内容中哪项是需要重点优化的呢

谢谢哦

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1楼 2012-12-27 13:48:54

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love_st

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

当然可以，引物探针、dNTPs 镁离子等等进行优化，既然酶是买的那么一定其相配套的reaction buffer也要有，有时候相应的酶，换个buffer效果也不错

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2楼2012-12-27 14:43:51

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qingsong35

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哇谢谢第一个回复的感激不尽
各种因素中哪个是优化的重点呢

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3楼2012-12-27 15:08:39

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dongrh1981

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【答案】应助回帖

Q-PCR可以自己优化。
优化的重点是引物探针，一般情况下商品化的酶搭配的buffer已属于较优的选择，所以buffer一般只是优化一下用量，主要是其中的Mg离子，dNTPs和一些辅助扩增的添加剂基本只能起少许的增强荧光强度或者提高PCR扩增效率等作用，一般不是优化的重点。
因此，如果你只是为了得到PCR扩增曲线，自己设计一两套引物探针，然后稍微优化下就行；如果为了得到很好的结果，比较快而简便的方法是直接用试剂盒。合成探针比较贵，设计多了就不如试剂盒方便了。
发文章的话建议自己设计几套，一般公司都不会告诉你试剂盒里面引物探针的序列的。

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