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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » QPCR自己优化可行吗 不买商业试剂盒
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qingsong35

铜虫 (小有名气)

[求助] QPCR自己优化可行吗 不买商业试剂盒

用Taqman探针做QPCR
如果不用商业试剂盒
而是自己买的酶 buffer dNTP Mg离子来优化的话
效果如何 或者说这样可行吗

如果可行 话这几项内容中哪项是需要重点优化的呢

谢谢哦
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1楼 2012-12-27 13:48:54
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qingsong35

铜虫 (小有名气)
哇 谢谢第一个回复的 感激不尽
各种因素中哪个是优化的重点呢
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3楼2012-12-27 15:08:39
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
当然可以，引物探针、dNTPs 镁离子等等进行优化，既然酶是买的那么一定其相配套的reaction buffer也要有，有时候相应的酶，换个buffer效果也不错
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2楼2012-12-27 14:43:51
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dongrh1981

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

Q-PCR可以自己优化。
优化的重点是引物探针，一般情况下商品化的酶搭配的buffer已属于较优的选择，所以buffer一般只是优化一下用量，主要是其中的Mg离子，dNTPs和一些辅助扩增的添加剂基本只能起少许的增强荧光强度或者提高PCR扩增效率等作用，一般不是优化的重点。
因此，如果你只是为了得到PCR扩增曲线，自己设计一两套引物探针，然后稍微优化下就行；如果为了得到很好的结果，比较快而简便的方法是直接用试剂盒。合成探针比较贵，设计多了就不如试剂盒方便了。
发文章的话建议自己设计几套，一般公司都不会告诉你试剂盒里面引物探针的序列的。
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呼吸的痛
4楼2013-01-06 09:31:15
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