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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 光谱分析 » 荧光酶标仪测定脂肪酶与底物反应后的吸光值，为什么各波长均没有变化？（附结果图）
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koalarola

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光酶标仪测定脂肪酶与底物反应后的吸光值，为什么各波长均没有变化？（附结果图）

大家好，请帮我看看我用荧光酶标仪测出的脂肪酶与底物反应的吸光值，我的中性脂肪酶测定波长分别为328、470nm，酸性脂肪酶测定波长分别为350、445nm。我的数据到底是设置波长出问题还是怎么回事？我用的是NUNC的96孔F-板，黑色的。测不出吸光值，十分着急
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    • 2012-12-23 15:33:03, 131.63 K

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1楼 2012-12-23 15:41:22
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11jxli1

禁虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助，欢迎常来分析版交流 2012-12-23 17:37:54
本帖内容被屏蔽
2楼2012-12-23 16:54:51
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koalarola

新虫 (小有名气)
经过11jxli1虫友的指点，附图。
最后一张是设置的波长数据，我用的是经典3mL反应体系0.1mL底物，0.1mL酶液加入到2.8mL缓冲液中迅速混匀，37℃下保温30min，终止反应后取200微升到酶标板上，得到的是图中的数据。并且，D排的7-12号和H排的9-12号均为加液体。

445nm.png



350nm.png



328nm.png



470nm.png



相关数据.png
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3楼2012-12-23 17:19:41
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koalarola

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 11jxli1 at 2012-12-23 16:54:51
你直接发图偏上来看一下
用荧光酶标仪测出的脂肪酶与底物反应的吸光值，我的中性脂肪酶测定波长分别为328、470nm，酸性脂肪酶测定波长分别为350、445nm。

谢谢指点，已附图。
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4楼2012-12-23 17:20:34
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koalarola

新虫 (小有名气)
以下是我参考测脂肪酶活的方法，附图

参考方法.png
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5楼2012-12-23 17:55:23
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jjp66546626

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
koalarola: 金币+1, ★有帮助, 谢谢参与。有没有其他可能？因为我取样200微升到酶标板上时，D排的7-12号孔和H排的9-12号孔均没有加样，但得到结果与其他板孔数据一样。 2012-12-24 13:32:16
貌似荧光过强  建议对所取200μl溶液进行稀释

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2012-12-23 18:09:11
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koalarola

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jjp66546626 at 2012-12-23 18:09:11
貌似荧光过强  建议对所取200μl溶液进行稀释

您好，谢谢您的回复。还有没有其他可能？因为我取样200微升到酶标板上时，D排的7-12号孔和H排的9-12号孔均没有加样。而其吸光值跟加样的吸光值接近甚至一样。
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7楼2012-12-23 18:52:48
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koalarola

新虫 (小有名气)
koalarola: 回帖置顶 2013-01-10 17:30:42
结果出来了，我没有设置激发波长和发射波长。乌龙啊，自学使用荧光酶标仪还是吃了很多亏的，希望以后有荧光酶标仪的教程资源可以上传给大家。
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8楼2013-01-10 17:30:17
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幽幽小草

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by koalarola at 2013-01-10 17:30:17
结果出来了，我没有设置激发波长和发射波长。乌龙啊，自学使用荧光酶标仪还是吃了很多亏的，希望以后有荧光酶标仪的教程资源可以上传给大家。

请问激发坡长跟发射波长怎样用酶标仪进行测定呢？，我是要测荧光性
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9楼2016-03-25 16:11:09
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许加龙莒县

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by koalarola at 2013-01-10 17:30:17
结果出来了，我没有设置激发波长和发射波长。乌龙啊，自学使用荧光酶标仪还是吃了很多亏的，希望以后有荧光酶标仪的教程资源可以上传给大家。

可以请教一下不，电话17512577505
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人生苦短，修炼一生。
10楼2020-11-11 20:54:05
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