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761429495

新虫 (小有名气)

[交流] PGAPZA载体的使用

各位大侠们，我想用毕赤酵母来表达谷胱甘肽合成酶基因，选用PGAPZA表达载体，直接找酶切位点和目的片段连接就可以了吗，为什么有的文献上说要再这个载体上加His4啊？
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1楼 2012-12-21 09:18:15
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bonbonzd

木虫 (小有名气)
★
761429495(金币+1): 谢谢参与
是不是为了后续目的蛋白纯化分离，我也是不太懂，呵呵
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2楼2012-12-22 16:05:29
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-12-24 18:57:57
有的比赤酵母是组氨酸缺陷型的，比如GS115，自身不能合成组氨酸，必须在培养基中补加组氨酸才能生长（天然培养基如YPD本身含组氨酸，不用添加，MM或MD就需要）。有的载体含HIS4基因，当转化后整合到酵母基因组后，his4基因可以合成组氨酸。因此，如果是含有His4基因的载体，就可以利用这个特点来筛选，转化后用不含组氨酸的平板，通常是MD平板来筛选重组子。
PGAPZaA载体是不含his4基因的，转化后筛选都是利用的上面的zeocin。有的人不想用zeocin（太贵了），就自己改构载体了，加一个his4基因。也可以将zeocin改成kanR基因，这样可以用G418来筛选。
方法很多，看自己怎么方便了。
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3楼2012-12-22 19:09:35
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761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopyzxx at 2012-12-22 19:09:35
有的比赤酵母是组氨酸缺陷型的，比如GS115，自身不能合成组氨酸，必须在培养基中补加组氨酸才能生长（天然培养基如YPD本身含组氨酸，不用添加，MM或MD就需要）。有的载体含HIS4基因，当转化后整合到酵母基因组后，h ...

哦哦 ，明白了 谢谢你哈
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4楼2012-12-24 10:04:29
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761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bonbonzd at 2012-12-22 16:05:29
是不是为了后续目的蛋白纯化分离，我也是不太懂，呵呵

呵呵，互相学习啊
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5楼2012-12-24 10:06:05
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761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopyzxx at 2012-12-22 19:09:35
有的比赤酵母是组氨酸缺陷型的，比如GS115，自身不能合成组氨酸，必须在培养基中补加组氨酸才能生长（天然培养基如YPD本身含组氨酸，不用添加，MM或MD就需要）。有的载体含HIS4基因，当转化后整合到酵母基因组后，h ...

哦哦 PGAPZaA是胞内表达载体还是胞外表达载体啊
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6楼2012-12-28 15:51:51
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 761429495 at 2012-12-28 15:51:51
哦哦 PGAPZaA是胞内表达载体还是胞外表达载体啊...

这个载体含有a-mating factor，是分泌性表达载体。
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7楼2012-12-28 19:14:00
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