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761429495

新虫 (小有名气)


[交流] PGAPZA载体的使用

各位大侠们,我想用毕赤酵母来表达谷胱甘肽合成酶基因,选用PGAPZA表达载体,直接找酶切位点和目的片段连接就可以了吗,为什么有的文献上说要再这个载体上加His4啊?
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761429495

新虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopyzxx at 2012-12-22 19:09:35
有的比赤酵母是组氨酸缺陷型的,比如GS115,自身不能合成组氨酸,必须在培养基中补加组氨酸才能生长(天然培养基如YPD本身含组氨酸,不用添加,MM或MD就需要)。有的载体含HIS4基因,当转化后整合到酵母基因组后,h ...

哦哦 ,明白了 谢谢你哈
4楼2012-12-24 10:04:29
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bonbonzd

木虫 (小有名气)



761429495(金币+1): 谢谢参与
是不是为了后续目的蛋白纯化分离,我也是不太懂,呵呵
2楼2012-12-22 16:05:29
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-12-24 18:57:57
有的比赤酵母是组氨酸缺陷型的,比如GS115,自身不能合成组氨酸,必须在培养基中补加组氨酸才能生长(天然培养基如YPD本身含组氨酸,不用添加,MM或MD就需要)。有的载体含HIS4基因,当转化后整合到酵母基因组后,his4基因可以合成组氨酸。因此,如果是含有His4基因的载体,就可以利用这个特点来筛选,转化后用不含组氨酸的平板,通常是MD平板来筛选重组子。
PGAPZaA载体是不含his4基因的,转化后筛选都是利用的上面的zeocin。有的人不想用zeocin(太贵了),就自己改构载体了,加一个his4基因。也可以将zeocin改成kanR基因,这样可以用G418来筛选。
方法很多,看自己怎么方便了。
3楼2012-12-22 19:09:35
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761429495

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by bonbonzd at 2012-12-22 16:05:29
是不是为了后续目的蛋白纯化分离,我也是不太懂,呵呵

呵呵,互相学习啊
5楼2012-12-24 10:06:05
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