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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 植物细胞RNA提取用的研钵要高温灭菌么？
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xudabin98

木虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by drxiao2005 at 2012-12-21 08:45:34
根本不用。
植物组织中含有丰富的RNA酶。
在活细胞中，这些RNA酶一般不会大量降解RNA。
RNA提取液中一般含有RNA酶抑制剂。
所以应注意的地方是在RNA提取之后，特别是重悬在水溶液中后。
磨样的时候主要保证低温 ...

你这个回复太果断，RNA提取液中一般含有RNA酶抑制剂，这个是不假，但是你要知道，抑制剂并不能够完全将所有的RNA酶全部抑制，肯定还会有一些会发挥作用的，酶动力学你应该好好看看。不知道你是否真的提取过RNA，提取的质量怎么样？研钵最好还是要处理的，你再细看看所有的试剂盒，上面都会标有经常更换新的手套，样品要带手套处理。
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11楼2012-12-21 15:59:46
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xudabin98

木虫 (正式写手)
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10楼: Originally posted by 游侠892 at 2012-12-21 14:41:57
我们实验室的做法是：锡箔纸包好，直接180℃烘烤4个小时左右，之后再放入-20℃冰箱中预冷备用。

你们这个做法真的非常不错！
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12楼2012-12-21 16:00:27
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xudabin98

木虫 (正式写手)
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研钵最好用锡箔纸包好，放在180度烘箱中处理6个小时以上。做实验有时细节很重要，很多人说这个不用处理，那个不用处理，粗放的做一下就可以，有时会能够得到结果，但肯定不是最好的结果，一旦实验最后结果出了问题，由于你前面处理没有按照规范的操作来进行，你都不知道到底是哪个地方出了问题，所以个人看法还是要好好处理一下。http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5191776 这是我提取的RNA
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13楼2012-12-21 16:03:10
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
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我觉得要处理的，用DEPC水浸泡过夜，比较保险，因为一旦下游出现问题，原因比较复杂，所以尽量力求每一步都是可信的，然后再往下做！
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14楼2012-12-21 16:34:10
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haiyanciniao

金虫 (著名写手)

自立自强自爱自律
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我们不会高温灭菌，就洗干净晾干了。用之前喷点酒精
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自立自强自爱自律，我就是我自己的神，在我活的地方！相信自己，相信未来。加油
15楼2012-12-21 16:51:38
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elise1987

金虫 (著名写手)
★
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个人觉得还是用DEPC处理后灭菌比较好。玻璃塑料制品，都应该进行RNase free 处理吧
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不折腾，不胡闹，珍惜时间和生命
16楼2012-12-21 17:08:28
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drxiao2005

金虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by xudabin98 at 2012-12-21 15:59:46
你这个回复太果断，RNA提取液中一般含有RNA酶抑制剂，这个是不假，但是你要知道，抑制剂并不能够完全将所有的RNA酶全部抑制，肯定还会有一些会发挥作用的，酶动力学你应该好好看看。不知道你是否真的提取过RNA，提 ...

我不是果断，更不是武断。
我提棉花RAN，就是这么干的。
我觉得磨样的时候RNA酶的主要来源是植物组织，而不是研钵或者手或者唾沫星子。RNA提取后期的操作则是另一回事了。
我们实验室研钵是公用的。我的每次都把研钵在自来水中刷一刷，用吸水纸擦干，就开始磨样。
我这样干很多年了，在实验室被称为豪放派。
说来像是笑话。根据我的经验，初提植物RNA最大的问题在于材料过多。在考虑抑制RNA酶的时候，首先加少一点植物材料。
当然，我并不反对戴手套、处理研钵和不说话。我只是提供一点我的经验。毕竟植物材料易得，初提RNA时喜欢多加些材料，希望提高RNA产量。殊不知，结果是引入了更多的RNA酶和杂质。
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17楼2012-12-22 10:18:31
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