| 查看: 4513 | 回复: 11 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[求助]
目的基因连接到克隆载体后提取质粒测序，序列有问题
|
||||
| 虫友们帮帮忙，我以质粒为模板进行PCR，之后连接到T载体上，转化入大肠杆菌中，提取质粒，双酶切鉴定，但是几个菌落酶切后的目的基因片段大小有点差别，有750bp的，有700bp左右的，还有650bp左右的。我就将这三个都拿去测序，结果750bp的是我要的序列，但是另外两个稍微短一些的序列也是我的序列，只不过中间分别少了十几个和二十几个氨基酸，其它的氨基酸序列都与正确的序列是一样的。怎么会发生这种情况呢？难道在大肠杆菌中发生剪接了，剪掉了一些氨基酸？有虫友碰到过这种情况吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有249人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
sheng-ping
铜虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 86
- 红花: 1
- 帖子: 75
- 在线: 85.9小时
- 虫号: 841702
- 注册: 2009-09-06
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
12楼2013-03-28 08:52:59
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24339.7
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
首先，指出你描述问题的错误的地方， “只不过中间分别少了十几个和二十几个氨基酸，其它的氨基酸序列都与正确的序列是一样的。”这里不是氨基酸序列，你描述的应该是核苷酸序列 “难道在大肠杆菌中发生剪接了，剪掉了一些氨基酸？”这里同样应是核苷酸序列。 “有750bp的，有700bp左右的，还有650bp左右的”，“结果750bp的是我要的序列，但是另外两个稍微短一些的序列也是我的序列，只不过中间分别少了十几个和二十几个氨基酸，其它的氨基酸序列都与正确的序列是一样的。” 据你描述这三个质粒应该都是你的引物扩增出来的，但有两个出现了两个质粒中间缺少一段序列的情况，我觉得你的序列中可能存在重复序列，然后PCR后，会少一个重复，你分析下你的序列，看看是不是我说的这种情况，也就是找下你的序列中有没有一段是重复序列。 |
2楼2012-12-19 23:25:09
3楼2012-12-20 05:59:59
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
4楼2012-12-20 09:22:13
